2007-06-05
org.kosen.entty.User@53ec0481
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세포의 콜로니에 알칼라인 포스페테이즈 시약을 처리하여 염색하였는데요
사용한 시약은 Bromochloroindolyl phosphate/nitrobluetetrazolium(BCIP/NBT)입니다.
염색결과 blue로 나오더군요
red가 아니구요..
이 결과 보니 두가지 양상이 뚜렷하게 보였습니다.
하나는 콜로니 하나는 파랗게 염색이되고 또 한군데에서는 파랗게 염색된 부분외에 염색이 안되어 하얗게 되어있는 부분이있는데
그럼 염색이 된곳이 분화가 된 부분인가요?
제가 실험을 해놓고도 해석을 못하고있습니다.
제가 공부한 대로 이론상이라면 분화된곳이 즉 염색된곳이라고 생각하는데요...
정확한 답변 부탁드립니다.
- Alkaline phosphatase
- Alkaline phosphatase staining
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 2
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답변
김동욱님의 답변
2007-06-08- 0
>세포의 콜로니에 알칼라인 포스페테이즈 시약을 처리하여 염색하였는데요 > >사용한 시약은 Bromochloroindolyl phosphate/nitrobluetetrazolium(BCIP/NBT)입니다. > >염색결과 blue로 나오더군요 >red가 아니구요.. > >이 결과 보니 두가지 양상이 뚜렷하게 보였습니다. > >하나는 콜로니 하나는 파랗게 염색이되고 또 한군데에서는 파랗게 염색된 부분외에 염색이 안되어 하얗게 되어있는 부분이있는데 > >그럼 염색이 된곳이 분화가 된 부분인가요? > >제가 실험을 해놓고도 해석을 못하고있습니다. > >제가 공부한 대로 이론상이라면 분화된곳이 즉 염색된곳이라고 생각하는데요... > >정확한 답변 부탁드립니다. > AP(alkaline phosphatase)-reporter gene을 transfection한후 staining한 실험인지요? 즉 분화시 발현되는 유전자의 promoter뒤에 AP유전자를 붙인 reporter system을 cell에 transfection시킨후 관찰한 결과라면 염색된 부분이 분화한부위입니다. -
답변
박세아님의 답변
2007-06-12- 0
>세포의 콜로니에 알칼라인 포스페테이즈 시약을 처리하여 염색하였는데요 > >사용한 시약은 Bromochloroindolyl phosphate/nitrobluetetrazolium(BCIP/NBT)입니다. > >염색결과 blue로 나오더군요 >red가 아니구요.. > >이 결과 보니 두가지 양상이 뚜렷하게 보였습니다. > >하나는 콜로니 하나는 파랗게 염색이되고 또 한군데에서는 파랗게 염색된 부분외에 염색이 안되어 하얗게 되어있는 부분이있는데 > >그럼 염색이 된곳이 분화가 된 부분인가요? > >제가 실험을 해놓고도 해석을 못하고있습니다. > >제가 공부한 대로 이론상이라면 분화된곳이 즉 염색된곳이라고 생각하는데요... > >정확한 답변 부탁드립니다. > BCIP/NBT 가 alkaline phosphatase의 기질로 사용되게 됩니다. phosphatase 작용에 의해 BCIP의 인산이 하나 없어지고 이 형태의 분자는 NBT의 도움으로 산화되여 blue 색을 띄는 분자로 바뀌게 됩니다. 여기서 NBT는 도움을 주기도 하지만, 도움을 주게되면 이것은 reduction이 되어 이것 또한 blue 색을 띄는 분자가 됩니다. 따라서 alkaline phosphatase가 있으면, 이 시약을 넣었을 때 blue 색이 됩니다... red라고 생각하신 것은 핵염색을 보통 red 로 하기 때문에 착각 하신것 같습니다.