2007-06-08
org.kosen.entty.User@357d06ab
김진철(jinchulkim)
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좀 바보같은 질문일거 같은데요..
프로토콜 같은 것도 없고 논문을 봐도 설명이 길게 나오지 않아서요
첫째는요
sumoylaion 실험을 할 때 보통 실험하는 걸 보면 ubiquitination 실험하듯이 substrate로 IP해서 sumo에 대한 항체로 detection하거나 substrate에 대한 항체로 detection하는데 어떤 사람들은 IP를 안하고 그냥 lysate에서만 sumo-substrate 보고서 sumoylaion되었다고 하는데 그렇게 해도 인정이 되는 건가요?
둘째는 저는 IP할 때는 IP complex에 sample buffer 넣고 boiling 하는 것으로 알고 있는데 sumoylaion 실험논문을 보면 죄다 boiling 하는 것이 언급이 안되어 있어서 boiling 하는게 아닌가 생각이 되어서. 사실 끓이면 sumo와 substrate가 떨어지니까 안끓이는게 아닐까 생각을 하기도 하거든요..자세한 원리같은 걸 잘몰라서 이런 질문 실은 몹시 창피하게 생각되네요.
셋째는 lysis buffer조성이 일반적인 IP 할때랑 다른 거 같은데요..sumoylaion 이 잘 되는 lysis buffer조성 좀 알려주세요
아니 프로토콜 같은 것좀 알려주시면 감사하겠습니다.
아무것도 셋팅되어있지 않은데 하려니까 너무 어렵습니다. 도와주세요.
제가 실험을 못해서 안나오는 건지, 잘 몰라서 안나오는 건지 아니면 원래 안되는 건지 확신이 서질안네요. 제가 하는 단백질이 PIAS들과 yeast two hybrid 에서 잡혀서 시작하는 거거든요. 꼭 좀 부탁드립니다.
- sumo
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