2007-06-29
org.kosen.entty.User@37a01841
백유미(undine1213)
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제가 cancer cell line에 물질을 투여해서 apoptosis가 일어나는지 확인하는 실험을 하는데요..
MTT assay나 DNA fragmentation 실험 결과, 농도 의존적으로 apoptosis를 유발시키는 것을 확인했습니다..
그런데 flow cytometyry 실험을 해 보니 control을 제외하고는 peak가 하나도 나오지 않더군요..
다른 사람에게 물어보니 제가 처리한 물질 때문에 그럴 수 있다고 하더군요..
사실 제가 처리한 물질이 고분자에다가 점성이 엄청 강해서 cell 회수 시, trypsin처리 만으로는 cell이 떨어지지 않거든요..control cell은 잘 떨어지는데 말이죠..
그래서 이 점성 때문에 cell을 회수해도 물질과 cell이 엉겨붙어있어서 flow cytometry 측정이 안 되는 것 같다고 하는데요...
이 물질과 cell을 분리해서 flow cytometry측정이 가능하게 하는 방법이 없을까요??
고수님들, 좀 도와주세요~부탁드립니다..
- apoptosis
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- flow cytometry
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답변 2
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답변
홍동호님의 답변
2007-06-29- 0
>제가 cancer cell line에 물질을 투여해서 apoptosis가 일어나는지 확인하는 실험을 하는데요.. >MTT assay나 DNA fragmentation 실험 결과, 농도 의존적으로 apoptosis를 유발시키는 것을 확인했습니다.. >그런데 flow cytometyry 실험을 해 보니 control을 제외하고는 peak가 하나도 나오지 않더군요.. >다른 사람에게 물어보니 제가 처리한 물질 때문에 그럴 수 있다고 하더군요.. >사실 제가 처리한 물질이 고분자에다가 점성이 엄청 강해서 cell 회수 시, trypsin처리 만으로는 cell이 떨어지지 않거든요..control cell은 잘 떨어지는데 말이죠.. >그래서 이 점성 때문에 cell을 회수해도 물질과 cell이 엉겨붙어있어서 flow cytometry 측정이 안 되는 것 같다고 하는데요... >이 물질과 cell을 분리해서 flow cytometry측정이 가능하게 하는 방법이 없을까요?? >고수님들, 좀 도와주세요~부탁드립니다.. 세포주를 붙는 세포가 아닌 세포로 실험하면 나올 가능성이 있을 듯 합니다. 오히려 혈액암 같은 것은 정상적인 상태에서도 약간의 아폽토시스가 나오고 있습니다. 답변이 되었기를... -
답변
윤철희님의 답변
2007-07-01- 0
우선 flow cytometry의 setting이 정상적으로 잘되어 있을 것이라는 가정에서 말씀드립니다.. cell cycle과 apoptosis를 잡는 방법은 일반적인 세포표면단백질 분석 방법과 다르기 때문이죠.. 제 생각에는 점도가 높다면 아마도 추가 washing과정이 필요할 것 같습니다.. 비누성분 (Tween등)을 농도가 다르게 만든 다음 처리구에서 효율적인 농도를 찾아서 실험을 진행하시면 될 것 같습니다.. 그리고 참고로, 말씀하신 내용 중 control cell은 잘 떨어진다는 말은 조금 잘못되지 않았는지 모르겠네요.. 여기서의 control은 동일한 처리이면서 apoptosis를 일으키는 물질이 없는 것이어야 할 것 같거든요? 세포가 점성때문에 죽었는지도 증명을 해야하고 말이죠.. 해결법 찾으시면 여기 오셔서 노하우도 가르쳐 주시죠.. 좋은 실험 되시기 바랍니다..