2007-08-18
org.kosen.entty.User@74de1311
Jungeui Hong(rjustice)
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안녕하세요...
대략 30개정도의 E.coli Knockout strain에 대해서 독성물질 몇가지를 처리해서 Minimum inhibitory concentration(혹은 sublethal concentration)을 결정하려고 합니다. 가장 간단한 방법은 물론 LB배지에서 키운뒤 흡광도를 측정하는 방법이겠지만 혼자서 30개 균주를 반복실험까지 해서 다 끝내려면 두달은 걸릴것 같고 정밀한 분석이라기 보다는 pre-screening의 의미가 있으므로 좀더 손쉽고 빠른 방법이 있었으면 합니다. 물론 정량분석이 가능해야 하므로 제가 생각할때는 96well에 dilution assay를 해서 INT(p-iodonitrotetrazolium violet)와 같은 염색약을 처리해서 각 well에서 세포가 자랐는지 확인하는 방법이 적절하지 않나 생각이 듭니다. 여기까지는 제가 개인적으로 알아낸 방법인데 솔직히 확신이 안들어서 조언을 청합니다...
제가 이해하고 있는 방식이 맞는건지 알고 싶습니다....MIC를 빨리 찾아낼 수 있는 정량적이면서도 눈으로도 쉽게 확인할 수 있는 방법이 어떤걸까요? 참고문헌이나 관련정보 아무것이라도 부탁드립니다...
미리 감사드려요....
- bioassay
- microplate bioassay
- 96 well
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 1
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답변
김중재님의 답변
2007-08-19- 0
말씀하신 대로 96 well plate 를 이용해 MIC 측정해 본 적 있습니다. 그다지 시간 많이 걸리지 않았던 것으로 기억하구요, E. coli 정도면 자란 정도를 OD 측정으로도 확인할 수 있으리라 생각됩니다. 물론, OD 를 측정할 수 있는 plate reader 가 있어야 겠구요. multi chanel pipette 이 있으면 상당히 편하게 실험할 수 있습니다. 뭐, 한 번의 실험을 위해 구입하긴 그렇지만, 있으시면 편하게 사용하실 수 있습니다. 제가 사용했던 균주는 특정 효소의 활성이 있는 녀석이어서, 성장 유무를 효소활성을 colorimetric method 로 측정해 아주 visual 하게 관찰할 수 있었습니다. OD 없이 사진으로만 MIC 의 결정이 가능할 정도로... 사용하시는 균주의 특정 효소활성 측정법을 이용하는 것도 고려해 보실만 하겠네요. ^^ 직접적인 도움을 드리지 못하는 답변같아 죄송합니다. 그냥 참고하시라구요...