2007-09-17
org.kosen.entty.User@6a353282
지유미(letraset)
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제가 bacillus 를 가지고 단백질 분석을 위해 2D-PAGE를 실행하고 있습니다.
그런데 여러논문에서는 bacillus cell을 깰때 ultrasonication보다는 french press를 이용해서 cell을 많이 깨는 것으로 나타났습니다.
제가 여건상 ultrasonication밖에 못하는데요 ㅠ_ㅠ
ultrasonication 후에 16000rpm정도에서 한시간 정도 원심분리해서 2D-PAGE를 걸어도 대부분의 단백질이 나왔다고 말할 수 있는건가요?
대부분의 논문에서는 ultracentrifugation을 꼭하는 것처럼 보여서 걱정입니다;;
또 lysozyme으로 cell을 깨서 2D-PAGE를 걸어도 관계없는 건가요?
의견 부탁드립니다.
- 2D-PAGE
- bacillus
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 1
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답변
장성재님의 답변
2007-09-18- 0
우선 어떤 단백질을 분석하실 것인지 궁금하군요. 목적하시는 단백질이 있으시다면 그 단백질이 완전히 용해되서 나오는 조건의 세포 파쇄법을 사용하시는 것이 좋을 듯 싶습니다. 막단백질일 경우에는 님께서 언급하셨듯이 세포 파쇄 후 초원심 분리를 통하여 막 fraction에서 단백질을 검출하는 것이 용이할 것입니다. 그러나 전체 단백질을 이용한 스크리닝 단계의 실험을 위해서라면 전체 단백질을 추출하는 방법을 찾으셔야 하겠죠. 확인 만을 위한 경우라면 lysozyme과 ultrasonication 처리 후 SDS/PAGE smaple buffer (2-mercaptoethanol) 처리만으로도 단백질을 확인 하실 수 있을 듯 싶은데.... 자신의 실험 목적에 알맞는 방법을 선택하시는 것이 중요합니다. 그러기 위해서 참고 문헌 등이 필요한 것이지요. 장비가 없다고, 불가능하다고 생각하지 마시고 주위의 선배님들이나 관련 기관을 검색하셔서 장치를 사용하시면 됩니다. 초원심분리기 등은 최근엔 웬만한 연구 기관에는 다 배치되어 있을 것 같은데요. 첨가: Bacillus의 경우 spore 상태 등 배양 조건 및 세포의 상태에 따라서도 단백질의 추출법이 다양합니다. 자신의 연구 목적에 알맞는 방법을 찾아보시길...