2007-10-09
org.kosen.entty.User@3a8345ef
이지연(elfinee)
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얼마전에 macrophage cell line J774를 얻어서 배양을 하고 있는데요, cell stock을 만들기 위해서 scraping 후에 centrifugation (1,200 rpm for 3 minutes)을 하는데 세포들이 잘 가라앉지 않더라구요. pellet이 너무 작게 얻어져서 다시 했는데도 별로 많이 건지지를 못했습니다.
이유를 도통 모르겠네요. 혹시 이 셀라인 배양해보신분 있으시면 조언 부탁드립니다.
- macrophage
- harvest
- centrifugation
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답변 2
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답변
김윤상님의 답변
2007-10-09- 0
Suspension culture에서 배양해 보시면 어떨까요? 불행하게도, 직접 동일한 세포주를 배양해 본 적은 없습니다만,.. 듣기로는 J774 의 경우, adherent cultures로 하실 경우, 세포를 떼어내기가 무척 어렵다고 하던데요. 본드로 붙인 것처럼 단단하게 붙는다는군요. Suspension으로 키우시면 split 하기도 쉽고, trypsin이나 EDTA 혹은 scraping으로 세포들을 떼어낼 때 생길 수 있는 손상(protein 손상)들을 피하실 수 있습니다. 찾아보니, 배양액을 제거 후 5mM EDTA를 5 ml 넣고 2-3분 처리해서 90% 정도 살아있는 세포를 얻었다는 한 연구자의 답변도 있더군요. 아래 사이트를 참조해 보세요. http://www.protocol-online.org/forums/index.php?showtopic=18138&st=0 http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/16321.html http://molecularbiology.forums.biotechniques.com/forums/viewtopic.php?p=31084&sid=da1dd5941de8fc9c3221d6bee85df6a7 -
답변
장성재님의 답변
2007-10-09- 0
세포가 원심 후 얻어진 너무 적다고 하셨는데, 세포 배양 용기의 크기 (플라스크)와 몇 % confluencies로 배양하셨는지? 그리고, 배양 용기 당 cell counting 하신 세포수를 알려주시길 바랍니다. 세포의 크기가 상당히 크므로, fibroblast나 epithelial cell line들 보다는 얻을 수 있는 세포수가 적은 것은 사실입니다. 먼저, Scraping 하신 후 플라스크의 세포 접착 면에 세포가 아직 남아있을 확률이 높습니다. Trypsin-EDTA 처리가 아니므로 세포를 표면에서 분리하기가 쉽지 않죠... Trypsin은 제외하고, 0.02% EDTA만을 처리해주어도 잘 떨어질 겁니다.