2007-10-16
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진정숙(jinpaldook)
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안녕하세요. adipose tissue를 가지고 실험을 하고 있는 학생입니다.
피하지방과 복부지방 그리고 aorta 주위의 adipose tissue를 채취하여 RNA, protein을 분리하여 RT-PCR, western blot을 하려고 합니다
혹시 실험시 주의할 점이나 특히 protein 분리시 주의할 점 등을 여쭤봅니다
분리하여 cell down을 하니 지방층이 위에 뜨던데 혹시나 sup.을 뜨다가 comtamination 되지 않을까 합니다. 몇번의 과정을 거쳐서 했는데도 좀 찝찝함이 있네요
좋은 방법을 가르쳐주세요.
- obesity
- adipose tissue
- aorta
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답변 1
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답변
장성재님의 답변
2007-10-16- 0
Adipose tissues에서 RNA와 단백질을 모두 분리하시길 원하시는 데 지방층이 걱정이 된다는 말씀이시군요. 현재 사용하시는 방법은 어떤 방법인가요? Trizol reagent를 사용하신다면 중간에 chlroloform 처리가 있기 때문에 그렇게 걱정하실 필요가 없으실 겁니다. Trizol의 사용설명서에 보시면 옵션으로 chrolofrom을 재처리해 줄 경우 순도가 좋아진다고 되어있습니다. 대신 얻어지는 RNA 양이 약간 줄어들겠죠.^^ Trizol을 사용하는 과정에서 단백질도 분리가 가능하니 사용설명서를 참고하세요. Trizol의 사용설명서는 웹에서 간단히 구하실 수 있답니다. 그리고, 웹에서 검색을 해보니 Qiagen에서 나오는 lipid extraction 키트를 사용하면 꽤 잘된다는 내용이 있네요. 참고하시길...