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지식나눔

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mouse embryonic stem cell

2007-10-16 org.kosen.entty.User@6398393c 김현숙(healing80)
  • 3
mouse ES 세포를 새로 만들었는데 MEF 위에서 키우고 있는데 기존것들에 비해서 outgrowth가 느리고 분화되려고 합니다. 다른 세포들은 괜찮은데 왜이럴까요? C57BL/6J를 mating 해서 만들었는데요 (다른 라인들도 마찬가지) 특히 이럴때는 뭐를 더 넣어주면 될까요? 많이 해보신 분들 계시면 답변주세요..
  • mouse embryonic stem cell
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답변 3
  • 답변

    장성재님의 답변

    2007-10-17
    • 0
    ES cell을 직접 분리 배양하지는 않지만, cell lines 및 primary cultures에 대한 경험을 토대로 조언을 드립니다. 대부분의 실험에 적용이 될 것 같은데요. 우선 원래 잘되던 것이 안될 경우에는 뭔가 원인이 반드시 존재합니다. 무엇인가 조건 (재료, 환경 등)이 바뀌었을 경우가 많죠. 현재까지 해오시던 대로 그대로 했는데도 결과가 다르다면 실험 자체의 디자인을 새로 해야만 한답니다. 그리고, 실험을 하실때 그때 그때의 조건 및 스텝을 기록해 두시는 습관을 두실 것을 권장합니다. 실험 노트를 잘 기록하시라는 겁니다. 제대로 된 실험 노트의 기록법을 알고 계신 분들이 그렇게 흔하지만은 않거든요. 기본적인 룰을 토대로 개개인의 특성을 살리는 부분이 크므로 객관적으로 평가 하기는 어렵지만.... 다른 실험들과 ES cell의 배양도 마찬가지 이겠죠. 가능하시다면 현재 실험하시는 조건과 예전에 하셨던 조건들을 자세히 비교해보시길 바랍니다. 계대 배양시에 초기 세포 농도나 feeder cell의 농도 등 여러 가지 변수가 있으니까요. 아니면 다른 연구자들의 방법을 참고로 하셔서 됩니다. 이런 단계들을 거치면 충분히 혼자서도 해결하실 수 있다고 생각합니다. 그러다가 다시 막히는 부분이 있다면 도움을 청하시는 것이 좋겠죠.^^ C57BL/6 blastocysts 유래의 ES cell의 경우 원래 129 strain에서 분리한 ES cell에 비해 배양이 어렵다고 합니다. 나중에 chimera를 제작할 때에도 효율이 떨어진다는 특성도 있구요. 자료를 좀 찾다가 보니 ES cell의 배양 및 특성에 대해 나온 웹사이트가 있어서 첨부합니다. 참고가 되시길... http://stemcells.nih.gov/info/scireport/appendixB.asp http://wheat.pw.usda.gov/~lazo/methods/au/cellbio.html
    답변수정
    ES cell을 직접 분리 배양하지는 않지만, cell lines 및 primary cultures에 대한 경험을 토대로 조언을 드립니다. 대부분의 실험에 적용이 될 것 같은데요. 우선 원래 잘되던 것이 안될 경우에는 뭔가 원인이 반드시 존재합니다. 무엇인가 조건 (재료, 환경 등)이 바뀌었을 경우가 많죠. 현재까지 해오시던 대로 그대로 했는데도 결과가 다르다면 실험 자체의 디자인을 새로 해야만 한답니다. 그리고, 실험을 하실때 그때 그때의 조건 및 스텝을 기록해 두시는 습관을 두실 것을 권장합니다. 실험 노트를 잘 기록하시라는 겁니다. 제대로 된 실험 노트의 기록법을 알고 계신 분들이 그렇게 흔하지만은 않거든요. 기본적인 룰을 토대로 개개인의 특성을 살리는 부분이 크므로 객관적으로 평가 하기는 어렵지만.... 다른 실험들과 ES cell의 배양도 마찬가지 이겠죠. 가능하시다면 현재 실험하시는 조건과 예전에 하셨던 조건들을 자세히 비교해보시길 바랍니다. 계대 배양시에 초기 세포 농도나 feeder cell의 농도 등 여러 가지 변수가 있으니까요. 아니면 다른 연구자들의 방법을 참고로 하셔서 됩니다. 이런 단계들을 거치면 충분히 혼자서도 해결하실 수 있다고 생각합니다. 그러다가 다시 막히는 부분이 있다면 도움을 청하시는 것이 좋겠죠.^^ C57BL/6 blastocysts 유래의 ES cell의 경우 원래 129 strain에서 분리한 ES cell에 비해 배양이 어렵다고 합니다. 나중에 chimera를 제작할 때에도 효율이 떨어진다는 특성도 있구요. 자료를 좀 찾다가 보니 ES cell의 배양 및 특성에 대해 나온 웹사이트가 있어서 첨부합니다. 참고가 되시길... http://stemcells.nih.gov/info/scireport/appendixB.asp http://wheat.pw.usda.gov/~lazo/methods/au/cellbio.html
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  • 답변

    이은종님의 답변

    2007-10-19
    • 0
    >mouse ES 세포를 새로 만들었는데 MEF 위에서 키우고 있는데 기존것들에 비해서 >outgrowth가 느리고 분화되려고 합니다. >다른 세포들은 괜찮은데 왜이럴까요? >C57BL/6J를 mating 해서 만들었는데요 (다른 라인들도 마찬가지) >특히 이럴때는 뭐를 더 넣어주면 될까요? >많이 해보신 분들 계시면 답변주세요.. > > 당연히 LIF는 넣으셨을거라 생각하고 Feeder를 바꾸어 보시는 것을 고려해보시는 것은 어떨까요? 일반 MEF보다는 STO cell line이 더 미분화를 유지시키는데 도움을 줬던것 같습니다
    답변수정
    >mouse ES 세포를 새로 만들었는데 MEF 위에서 키우고 있는데 기존것들에 비해서 >outgrowth가 느리고 분화되려고 합니다. >다른 세포들은 괜찮은데 왜이럴까요? >C57BL/6J를 mating 해서 만들었는데요 (다른 라인들도 마찬가지) >특히 이럴때는 뭐를 더 넣어주면 될까요? >많이 해보신 분들 계시면 답변주세요.. > > 당연히 LIF는 넣으셨을거라 생각하고 Feeder를 바꾸어 보시는 것을 고려해보시는 것은 어떨까요? 일반 MEF보다는 STO cell line이 더 미분화를 유지시키는데 도움을 줬던것 같습니다
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  • 답변

    김유찬님의 답변

    2007-10-22
    • 0
    >mouse ES 세포를 새로 만들었는데 MEF 위에서 키우고 있는데 기존것들에 비해서 >outgrowth가 느리고 분화되려고 합니다. >다른 세포들은 괜찮은데 왜이럴까요? >C57BL/6J를 mating 해서 만들었는데요 (다른 라인들도 마찬가지) >특히 이럴때는 뭐를 더 넣어주면 될까요? >많이 해보신 분들 계시면 답변주세요.. > > 1) 일단 느리게 자란다는 것은 ES cell 자체에 문제가 생길 수 있으므로 ES cell에서 발현되는 여러 marker들을 일단 확인해 보시기 바랍니다. 2) ES cell karyotype을 통해 염색체 이상인지 확인하시기 바랍니다. karyotype이상으로 분화될 가능성과 growth 가 느린이유를 경험하엿습니다. 3) MEF의 density를 되도록이면 조절할 필요가 잇습니다. cell 마다 약간씩 다를 수가 있습니다.
    답변수정
    >mouse ES 세포를 새로 만들었는데 MEF 위에서 키우고 있는데 기존것들에 비해서 >outgrowth가 느리고 분화되려고 합니다. >다른 세포들은 괜찮은데 왜이럴까요? >C57BL/6J를 mating 해서 만들었는데요 (다른 라인들도 마찬가지) >특히 이럴때는 뭐를 더 넣어주면 될까요? >많이 해보신 분들 계시면 답변주세요.. > > 1) 일단 느리게 자란다는 것은 ES cell 자체에 문제가 생길 수 있으므로 ES cell에서 발현되는 여러 marker들을 일단 확인해 보시기 바랍니다. 2) ES cell karyotype을 통해 염색체 이상인지 확인하시기 바랍니다. karyotype이상으로 분화될 가능성과 growth 가 느린이유를 경험하엿습니다. 3) MEF의 density를 되도록이면 조절할 필요가 잇습니다. cell 마다 약간씩 다를 수가 있습니다.
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