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지식나눔

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ROS관련 Enzyme (SOD, CAT, etc) assay protocol 구합니다!

2007-11-06 org.kosen.entty.User@61c9dadd 전명숙(girlofrabbit)
  • 2
Raw cell에 H2O2를 처리하고 cell lysate로 enzyme assay를 하려고 합니다. Reference paper와 kit의 data sheets를 참고해서 몇번 시도했습니다만 생각처럼 쉽게 조건이 잡히지 않네요. 실제로 실험을 하고 계신 분께서 자세하게 알려주셨으며 합니다.
  • H2O2-induced
  • Raw264.7 macrophage
  • oxidative stress
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 2
  • 답변

    김윤상님의 답변

    2007-11-06
    • 0

    첨부파일

    저는 Molecular Probes (Invitrogen) 에서 판매하는 carboxy-H2DCFDA를 사용했었습니다. 아래 제 실험과정에 대한 설명이 있으니 참조하세요. BM neutrophils were prepared, resuspended in HBSS-, plated at 1.0 x 10^6/well of a 96-well plate, and incubated for at least 1 hr at 37°C. The buffer was then removed and the cells resuspended in 200 ul of PBS containing 5 uM carboxy-H2DCFDA (Molecular Probes, Inc., Eugene, OR), in the presence or absence of 0, 5, 10 or 20 ng/ml PMA (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). Fluorescence was measured on a Wallac 1420 VICTOR microplate reader at various times thereafter. The plate was kept at 37°C and maintained in the dark in between measurements. 첨부한 파일을 참조하세요.
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    저는 Molecular Probes (Invitrogen) 에서 판매하는 carboxy-H2DCFDA를 사용했었습니다. 아래 제 실험과정에 대한 설명이 있으니 참조하세요. BM neutrophils were prepared, resuspended in HBSS-, plated at 1.0 x 10^6/well of a 96-well plate, and incubated for at least 1 hr at 37°C. The buffer was then removed and the cells resuspended in 200 ul of PBS containing 5 uM carboxy-H2DCFDA (Molecular Probes, Inc., Eugene, OR), in the presence or absence of 0, 5, 10 or 20 ng/ml PMA (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). Fluorescence was measured on a Wallac 1420 VICTOR microplate reader at various times thereafter. The plate was kept at 37°C and maintained in the dark in between measurements. 첨부한 파일을 참조하세요.
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  • 답변

    장성재님의 답변

    2007-11-06
    • 0
    현재 사용하고 계시는 assay kit는 어떤 것을 사용하시는 지요? 스탠다드 실험의 조건이 잘 맞지않는다는 것 인가요? 님께사 사용하시는 실험 조건을 좀 더 자세히 알려주세요?
    답변수정
    현재 사용하고 계시는 assay kit는 어떤 것을 사용하시는 지요? 스탠다드 실험의 조건이 잘 맞지않는다는 것 인가요? 님께사 사용하시는 실험 조건을 좀 더 자세히 알려주세요?
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