2007-11-09
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이선민(danji2026)
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단백질 정량을 하고 정량한 값을 sample buffer와 같이 넣고 끓일때 전체 볼륨을 물로 맞추어도 되나요?
- sds
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답변 4
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답변
김범수님의 답변
2010-01-12- 2
>단백질 정량을 하고 정량한 값을 sample buffer와 같이 넣고 끓일때 전체 볼륨을 물로 맞추어도 되나요? 가능하면 샘플버퍼로 맞추어 주시는 것이 좋습니다. -
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김윤상님의 답변
2007-11-10- 0
대개 Sample buffer 혹은 gel loading buffer라고 부르는 것들은 버퍼(Tris)와 SDS, bME (혹은 DTT), 그리고 Bromophenol blue같은 dye 등으로 이루어져 있습니다. 편의에 따라서 2x 4x 6x 등의 형태로 만드는데, (회사에서 구입하시지 않고 직접 만드신다면) 만드는 과정에서 물로 적당한 농도로 (몇 배로 농축된 것을 만드느냐는 님의 기호에) 맞추게 됩니다. 따라서, sample buffer에 준비하신 단백질 시료를 섞을 때, 물로 전체 용량을 맞추는 것은 아무 문제가 없습니다. 아니, 그렇게 하는 것이 일반적이라고 보시면 됩니다. 예를 들어, 님이 전기영동하려는 단백질 양은 30 ug이고 시료의 농도는 A가 3 ug/ul, B가 2 ug/ul 라고 합시다. 님이 갖고 있는 sample buffer가 2x라면, gel에 loading 하는 전체 용량은 30 ul 이 됩니다. --> 제일 농도가 낮은 B에 맞추다 보니, 시료의 용량은 15 ul이고 2x sample buffer 15 ul를 더하니 30 ul 이 되는 것입니다. 이 때, 필요한 단백질 시료의 용량은 A는 10 ul, B는 15 ul 입니다. B의 경우는 그냥 섞으면 됩니다만, A의 경우 5 ul 이 비게 됩니다. 이 5 ul는 물을 넣어 주시면 됩니다. 님의 질문하시는 의도에 맞는 답이길 빌면서, 실험 잘 하시길 빌겠습니다. 그럼, 이만 -
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전현주님의 답변
2007-11-10- 0
>단백질 정량을 하고 정량한 값을 sample buffer와 같이 넣고 끓일때 전체 볼륨을 물로 맞추어도 되나요? 저는 주로 cell lysis buffer를 넣어서 일정양으로 맞추어 준 다음, 일정양의 gel loading buffer를 넣어 줍니다. 물을 넣어주어도 괜챦았던 것 같지만, lysis buffer에 protein을 보호할 수 있는 여러 성분들이 함께 있으니까 그게 더 좋을 것 같아서요. Gel loading buffer를 넣은 후에 volume을 맞추어 주려고 한다면, 당연히 1X gel loading buffer (물에 희석을 했든 lysis buffer에 희석을 했든)로 보충을 해주어야겠지요. -
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장성재님의 답변
2007-11-12- 0
위의 두 분께서 쉽게 잘 설명을 해주셨는데, 제 사견을 말씀드린다면... 실험하는 순서를 정확히 하신다면 그리 어렵지 않은 문제입니다. 단백질을 정량하신 후 정량한 값을 sample buffer와 같이 넣고 끓일 때 전체 볼륨을 물로 맞추어도 좋은 지에 대해 물으셨는데.... 각각의 시료 단백질을 정량 하신 후에 전기영동용 시료를 따로 준비하실 것으로 생각됩니다만, 일정 볼륨 내에 포함된 단백질이 가열과정에서 날라가 버리지는 않으므로, 각각의 단백질 시료를 동일 양 각각의 시료 튜브에 넣어주신 후 제일 적은 단백질양을 갖는 시료의 볼륨만큼 전체 시료의 볼륨을 lysis buffer로 통일시켜주시고 나서 2X SDS-sample buffer를 시료와 동일 볼륨으로 처리하시면 간단합니다. 참고로 저는 대개 전기영동에 사용하는 시료보다 1.5배 정도로 단백질 시료를 PCR용 튜브에 준비한 후에 위와 같은 절차로 농도를 맞추고 thermal cycler에서 가열 반응을 합니다.