2007-11-13
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이선민(danji2026)
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정말 초보적인 질문이라서 죄송합니다. sample buffer에는 2x, 4x, 5x, 6x등 다양하게 있습니다. 여기서 2x는 sample과 1:1로 섞는것이고 2x는 sample buffer를 2배로 넣어주는 것이 맞나요?
- sample buffer
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답변 4
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답변
김범수님의 답변
2010-01-12- 2
>정말 초보적인 질문이라서 죄송합니다. sample buffer에는 2x, 4x, 5x, 6x등 다양하게 있습니다. 여기서 2x는 sample과 1:1로 섞는것이고 2x는 sample buffer를 2배로 넣어주는 것이 맞나요? 네...맞습니다. 샘플과 샘플버퍼를 1:1로 섞은 후에 이를 희석해서 쓰는 것이 펀합니다. -
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김윤상님의 답변
2007-11-13- 0
2x 라고 할 때에는 두 배로 농축 (concentrated) 되어 있다고 생각하시면 됩니다. 따라서, 1배로 희석하기 위해서는 sample buffer 같은 용량의 시료와 섞으시면 됩니다. 즉, 시료와 sample buffer를 1:1로 섞으시면 됩니다. DNA, RNA 이든 단백질이든지간에, gel loading buffer 혹은 sample buffer가 6x 라고 하면, 1 volume의 sample buffer 에 5 volumes의 시료(혹은 buffer를 뺀 나머지 모든 시료들)를 넣는다고 생각하시거나, 혹은 1/5 volume의 sample buffer 에 1 volumes의 시료를 넣는다고 생각하시면 됩니다. 2x 4x, 5x, 6x, 10x 라는 것은, 그 숫자만큼 농축되어 있다는 말입니다. 따라서, 10x의 경우 용량의 9(=10-1)배의 buffer 혹은 물 혹은 시료 (상황에 따라 다릅니다만)를 넣어주면 된다는 뜻으로 이해하시기 바랍니다. 쉽게 계산하시는 방법은, 시료(혹은 물과 버퍼 및 시료가 모두 더해진 용액)를 기준으로 하시면, n배 농축(n x) sample buffer 라면, 시료의 용량의 1/(n-1) 배의 sample buffer를 넣어 주시면 되고, sample buffer를 기준으로 하시면, 시료의 총 용량은 sample buffer의 (n-1)배로 만드시면 됩니다. 도움이 되었기를 빕니다. -
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장성재님의 답변
2007-11-13- 0
>정말 초보적인 질문이라서 죄송합니다. sample buffer에는 2x, 4x, 5x, 6x등 다양하게 있습니다. 여기서 2x는 sample과 1:1로 섞는것이고 2x는 sample buffer를 2배로 넣어주는 것이 맞나요? SDS-PAGE를 새롭게 배우고 계신 것 같네요. 초보적인 것이라도 질문을 하시는 것은 매우 중요합니다. 그리고, 더욱 중요한 것은 교과서 (Biochemistry or Protein Methods etc.)를 한번 숙독해보시길 바랍니다. 일단 왜 위와 같이 다양한 농도로 농축된 sample buffer가 있는지를 알아야 합니다. 이유는 간단합니다. 만약 님께서 준비한 시료의 단백질 농도가 낮아서 sample buffer로 덜 희석되게 하고 싶을 때 높은 농도, 즉, 4x, 5x, 6x 등으로 농축된 sample buffer를 사용하면 일반적으로 사용하는 2x에 비해 더 많은 양의 단백질을 loading 할 수 있게 되겠죠^^. 2x, 4x, 5x, 6x의 의미는 sample buffer를 사용할 때의 희석 배수랍니다. 2x는 단백질 시료와 1:1로 2배 희석하는 것이고, 4x는 4배가 희석되도록 단백질 시료를 넣어주면 됩니다. 물론 시료의 농도가 높을 땐 lysis buffer 등을 첨가해서 희석해주면 되죠. -
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최성원님의 답변
2007-11-14- 0
Buffer 사서 쓰는것도 중요하지만. 한번 만들어서 써보시고 구성 내용의 물질이 어떤 작용을 하는지 한번공부해보심도 괜찬을거같은데요.