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장교수님 안녕하세요! 반갑습니다. 저는 제약회사에서 연구하고 있는 이풍석이라고 합니다. 먼저 관심가져주셔서 감사합니다. 리포솜 관련책도 여러권 가지고 있으나 실험방법의 자세한 부분까지 설명이 되어 있지는 않은 것 같습니다. 다음은 추가적인 정보입니다. 현재 연구중인 약물은 약산성 약물이며 수용성입니다. 제가 만든 리포솜에는 PC, PG, cholesterol을 사용하고 있습니다. 예비실험결과 conventional liposome에서 약물의 봉입율이 20%미만이었습니다. 그래서 많이 알려져 있는 remote loading방법을 찾아보게 되었고, 그 중 ammonium gradient나 pH gradient방법이 많이 연구되고 있는 것을 확인하였습니다. 따라서 저도 그 방법을 응용해 보려고 합니다. 다만, 기존 연구의 대부분은 doxorubicin 과 같이 염기성 약물에 대한 것이기 때문에 저는 그 방법을 거꾸로 적용하고자 합니다. 리포솜 안팎의 pH를 기존의 방법과 반대로 설정하는 것이지요.(더 세부적인 방법을 공개하기는 어려울 것 같습니다.) 제가 구상한 방법은 pH 7.4 buffer에서 free liposome을 만들고, 리포솜외부 medium을 pH를 약물이 녹아있는 pH 4 buffer로 교환하여 약물을 봉입하는 것입니다. 다양한 방법이 있겠지만, 저는 우선 column형태의 sephadex (brand name :HiTrap)를 이용한 gel filtration 방법이 사용할까 하는데, 여기서 궁금한 것은 어떻게 효과적으로 버퍼를 교환할 수 있을까 하는것 입니다. column에 liposome을 loading하고 교환할 버퍼로 elution하면 되는 것인지, 이 때 약물이 녹아 있으므로 약물은 column내에 오래머무를 수 있을 것 같은데 그것은 어떻게 해결해야 되는지(물론 약물을 나중에 녹여도 됩니다), 또 버퍼교환시 중요한 요소(flow rate, volume 등)에는 어떤것이 있는지 등 전반적인 방법이 궁금합니다. 사실 실제 일을 하는 곳에서 데모를 받아보고 싶습니다만, 현실적으로 어려워서... 직접해봐야 알 수 있겠지요? 처음해보는 작업이라 막막하고, 무턱대고 시작하자니 부담스럽고..그렇습니다. 그리고, resin의 종류는 리포솜의 대략의 분자량을 고려해서 정하면 될 것 같습니다. 대략 sephadex G-25 or G-50 정도 될것 같습니다. 정교수님 혹시 참고가 될만한 자료가 있다면 염치불구하고 부탁드려봅니다. >리포솜제조시 pH gradient방법을 이용하여 약물을 로딩하려고 합니다. > >이때 pH가 서로 다른 buffer를 효과적으로 교환할 수 있는 방법을 찾고있습니다. > >문헌에는 sephadex G-25 or G-50을 이용한 buffer exchange방법이 많이 소개되고 있는것 같습니다만, 처음 시도하는 것이라서 어떻게 해야할지 아이디어가 잘 떠오르지 않습니다. > >sephadex의 종류도 다양해서 어떤것을 사용하야 하는지 사실 좀 망막합니다. > >기존에 비슷한 작업을 해보신분이 있으시면 프로토콜이나 관련 문헌을 공유해주실 수 있으신지요? > >문헌은 여러개 가지고 있으나 자세한 방법이 나와 있는 것이 없어서 참고하는데 어려움이 있습니다. > >부탁합니다.

어떤 약물을 사용하시는지요? 어떤 리포좀의 formulation을 사용하시는지요? 대상 약물을 liposome에 encapsulation하는데 최적의 방법이 pH gradient입니까? 모두 조사를 마치신 후에 여기에 질문을 올리셨으리라 생각됩니다. 위의 사항들을 모두 고려한 후에 실험법을 결정하셨겠지요. 그렇다면, 막히신 부분이 어떤 부분인가요? resin의 선택인가요. column의 선택이신가요? 거의 준비가 다 된 상태이신것 같은데, 직접 비교 실험을 해보시는 편이 나을 듯 싶습니다. 실험법을 자세히 아시고 싶으시다면, liposome에 관련된 실험서가 시중에 나와 있으테니 그것을 참고하시는 편이 나을 듯 싶습니다. liposome을 이용한 약물의 포집은 벌써 20년전쯤부터 활발히 연구가 진행되고 있으니, 물론 논문 뿐이 아닌 관련 서적들을 통해 많이 소개가 되어있을 것으로 생각됩니다. 그리고 논문에 실린 reference 중 pH gradient를 이용한 것들 중 original paper를 참고하시면 좀더 자세한 내용이 나와 있을 겁니다. 그런데, 그 당시엔 직접 glass column에 resin을 packing해서 사용했을 겁니다. 저도 십수년전 그렇게 했었으니....

제가 리포좀을 연구하던 때는 꽤나 오래 전 일입니다. 얼마나 도움이 되실지 모르겠군요. 어제 답글을 보고 나름대로 자료를 찾아봤습니다만... 역시 이쪽 분야는 특허의 대상이 되므로, 특허 쪽 자료가 비교적 설명이 잘 되어있더군요. 기업체에 계시니 나중에 개발 하실 때에는 특허를 피하실 수 있는 새로운 방법을 개발하시길 바랍니다. 우선, 특허 쪽 자료의 링크를 걸어드릴테니 한번 검토해 보시길 바랍니다. 비교적 자세한 실험 방법이 명기되어 있으므로 도움이 되실 겁니다. http://www.patentstorm.us/patents/5192549-fulltext.html 그리고, pH gradient 이외에도 ion gradient를 이용한 방법이 있던데 혹시 참고가 되신다면 좋겠네요. 논문을 첨부합니다. 여러 가지 방법을 비교 검토하실 필요가 있을 줄 압니다.