2007-11-19
org.kosen.entty.User@473f2192
강재성(naya3482)
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혼합 백신에서 바이러스와 박테리아를 분리 후, 각각에서 protein을 추출 하려고 합니다.
제가 궁금 한 것을 각각 나열을 해 보겠습니다.
1. 바이러스와 박테리아가 혼합이 되어있기 때문에 각각을 분리를 해야 합니다. 백신을 PBS에 녹인 후,분리 하기 위해서는 centrifuge를 이용하여 분리를 하려고 합니다.
각각 centrifuge 할 때의 조건들이 어떻게 되는지 궁금합니다.
2. 일반적으로 protein을 추출을 할 때 RIPA buffer를 이용을 하는데, 바이러스나 박테리아에서 protein을 추출할 때는 어떻게 하는 것이 좋은지요? 참고로 bacteria는 gram (+) 입니다.
sonicator를 이용하여서 추출 하는 방법이 있다고 하는데, 박테리아나 바이러스가 PBS에 있는 상태에서 sonication을 하게 된다면, protease에서 protein이 degradation되지는 않는지요?
많은 고수님들의 경험담을 간절히 기다리고 있습니다~
좀 도와주세요ㅜ.,ㅜ
- bacteria
- virus
- vaccine
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 2
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답변
최기섭님의 답변
2007-11-23- 0
백신에서 바이러스와 박테리아를 분리한다는 것이 잘 이해가 안되네요. 1. 혼합백신이건 monovalent백신이건 시판된 제품안에 virus와 bacteria는 없습니다. 단지 그 antigen이 있을 뿐이지요. 혼합백신이라고 하면, DTaP나 MMR이 있구요. 또한, DTaP와 polio vaccine, Haemophilus influenza vaccine or HBV vaccine을 함유한 4가, 5가 백신등이 있기는 한데, 백신에서 live한 virus나 bacteria를 분리할 수는 없습니다. 2. 미생물에서 단백질을 추출할때 protease inhibitor solution을 첨가합니다. 그러면, protease에 의해서 분해되는 것을 막을 수 있습니다. Sigma에서 cocktail solution을 팔고 있습니다. EDTA나 Phenylmethylsulfonyl Fluoride (PMSF) 를 사용하셔도 됩니다. -
답변
유용규님의 답변
2007-11-27- 0
실제로 백신이 박테리아에 오염되었다는 신고로 인해서 해당백신에서 박테리아를 분리해서 API kit를 이용해서 동정한 적도 있구요.... 그때 분리되었던 미생물은 Bacillus cereus group이었던걸로 기억되네요... 바이러스에 대한 것은 잘 모르겠네요 저의 경우는 혈액배지에 도말해서 키운적은 있고... 거기에서 단백질을 추출한 적은 없습니다.