2007-11-20
org.kosen.entty.User@2552844
서기원(majimotai)
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단백질에 인산화가 되었는지 안되었는지 알기 위해서 western blot를 통해서 인산화된 단백질에 특이적으로 붙은 항체를 사용하고 일반적으로 구입해서 사용하는 걸로 알고 있는데 저는 이러한 항체 제작 원리를 좀 알고 싶습니다.
알고 계신분이나 유용한 싸이트 있음 알랴주세요.. 감사..
- antibody
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답변
김형기님의 답변
2008-01-28- 0
>단백질에 인산화가 되었는지 안되었는지 알기 위해서 western blot를 통해서 인산화된 단백질에 특이적으로 붙은 항체를 사용하고 일반적으로 구입해서 사용하는 걸로 알고 있는데 저는 이러한 항체 제작 원리를 좀 알고 싶습니다. >알고 계신분이나 유용한 싸이트 있음 알랴주세요.. 감사.. 항체를 제작하는 방법은 먼저 항원을 준비해야 합니다. 항원은 단백질도 될 수 있고 펩타이드를 이용하기도 하고 chemical 자체를 이용하기도 합니다. 말씀하신 인산화 항체를 제작하는 방법은 일반적으로 펩타이드를 modifiction하여 제작합니다. 인산화되는 부분은 T, S, Y 세가지 아미노산 밖에 없기 때문에 full size protein(물론 인산화된 단백질)으로 항체를 제작하게 되면 항체가 만들어져서 단백질을 인식하는 부분이 여러 곳이 되므로 제작 후 인산화 된 단백질을 detection하기 보다 일반 단백질을 detection하는 경우가 더 많습니다. 그러므로 펩타이드를 짧게 합성하고 원하는 부분에 인산화를 시켜 그 펩타이드로 항체를 제작하게 됩니다. 그렇게 되면 인산화된 형태의 단백질만 detection할 확률이 높아지게 됩니다. 펩타이드는 합성하는 회사가 있으므로 원하는 길이의 인산화 형태로 합성하면 됩니다. 다른 궁금하신 점이 있거나 부족한 부분이 있으시면 연락주세요