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immunohistochemistry란 그리 어려운 기술이 아닙니다. 물론 생체로부터 분리한 조직을 이용하여 section을 만드는 것은 경험을 필요로 하지만, 모든 실험이 그렇듯이 반복을 통하여 터득하실 수 있답니다. 우선 님께선 조직 면역 염색법에 대해 공부를 하시길 바랍니다. 님께서 알고자 하시는 8-OHdG immunohistochemistry는 특정 스트레스 조건 하에서 변형된 DNA의 손상을 8-Hydroxy-2-deoxyguanosine (8-OHdG)에 대한 항체를 이용하여 레이블링 (labeling) 하는 것 입니다. 아래의 사이트에 가 보시면 8-OHdG에 대한 면역 조직 염색법이 설명되어 있답니다. 참고 하세요. http://www.ihcworld.com/_protocols/antibody_protocols/8-ohdg_oxis_research.htm 그리고, 간단하게 면역 조직 염색법에 대해 설명을 드리면, 다음과 같습니다. # 면역조직화학염색이란? - 정의 면역조직화학염색이란 항원과 항체간의 반응에서 예민성과 특이성을 이용 조직내의 단백질이 세포질 내에 만들어지며 그 단백질에 대한 생성물질을 검출하는 염색법으로 일차항체를 결합시키고 그 항체에 대한 이차항체를 육안으로 찾아볼 수 있도록 하는 방법으로 면역글로부린, 호르몬, 효소 및 종양의 maker검출 등의 병리조직 분야와 진단에서 어느 부위가 단백발현을 하는지를 현미경하에서 직접 눈으로 관찰하는 형태학적 검사이다. - 장점 면역조직화학염색법은 발현조직의 부위 즉 형태(Morphology)를 밝힐 수 있는 방법으로 Western Blotting 방법이 발현 여부만을 알 수 있는 기술검사라면, 면역조직화학법은 조직의 어떤 부위에서 단백이 발현 되는가를 정확히 육안으로 관찰하는 일종의 분석검사라고 할 수 있다. 면역조직화학검사는 지금까지 형태학적인 소견만으로는 진단을 내리기 어려운 점을 보완해 주고 있으며, 형태학적 변화가 미세하거나 경계성 병변(borderline lesion)인 경우에 정확한 진단을 내릴 수 있도록 객관적인 정보를 제공하여 주고 있다. 연구자들은 세포나 조직에 존재하는 항원의 검출을 위한 일차항체의 개발을 위하여 노력을 계속하고 있으며 앞으로 보다 더 민감하고 특이성을 갖는 검사방법을 개발하고 있다. 따라서 면역조직 화학적 검사는 임상의들이 진단 및 연구에 이용할 수 있는 간편하고 유익한 검사방법이 될 것으로 생각된다. # 상용화된 면역 조직염색 방법 - PAP 법 과산화효소에 대한 항체를 만들고, 이 항체와 과산화효소를 면역학적으로 결합시켜 형성된 면역 복합체인 PAP(Peroxidase-anti pe-roxidase)를 사용하는 방법이다. 이 방법은 먼저 표본내의 항원을 일차항체 및 이차 항체와 반응시킨 후에 일차항원과 같은 동물에서 만든 PAP를 이차항체와 결합시켜 양성 반응을 관찰하는 것이다. PAP법은 하나의 항원-항체 반응물에 3개의 과산화효소가 결합되어 있어서 면역반응물을 확인하는데 민감성이 증가된다. - ABC 법 1981년 Hsu A-M 등에 의해 처음 소개된 ABC법은 당단백인 Avidin이 저분자량 비타민인 Biotin에 친화력이 매우 강한 원리를 이용한 방법이다. Avidin은 계란 흰자위에 존재하는 당단백으로서 4개의 Biotin과 결합할 수 있는 입체구조를 갖고 있다. Biotin (Vitamin-H)은 쉽게 항체의 Fc부분에 부착되므로 이차항체에 부착시켜서 사용하고 있다 (Biotinylated Antibody). ABC방법의 처리과정은 먼저 일차항체를 조직면에 존재하는 항원에 결합시킨 후 Biotin이 부착된 이차항체 (Biotinylated Antibody)를 반응시킨다. 그리고 Avidin과 효소가 부착된 검출계(Avidin/Biotinylated Enzyme)를 이차항체에 부착된 Biotin과 결합하게 된다. 이 방법은 하나의 항원에 여러개의 효소가 부착될 수 있으므로 민감도가 매우 높은 방법이며 현재 가장 많이 이용하고 있는 방법이다. 이 방법에 사용되는 Avidin에는 탄수화물이 존재하여 Lectin과 같은 물질에 친화력을 나타내므로 비특이적인 결합을 할 수 있다.