지식나눔

probe의 5' 말단에 Fluorescein 붙이고 3' 말단에 biotin 붙여서 ELISA할때 Fluorescein 결합방법의 차이에 따라서 발색효율이 달라질 수 있나요?

5' 말단에 Fluorescein 붙이고 3' 말단에 biotin 을 붙인 probe와 anti-F-HRP 를 혼합하고 Streptavidin coated plate에 넣은 후 HRP substrate solution을 넣어서 발색정도를 보는 실험을 하는데요..... probe와 대응하는 염기서열이 있을 경우에는 probe의 5'말단과 antibody가 결합을 하게 되고, Fluorescein-antibody복합체가 streptavidin coated plate에 probe의 3'에 있는 biotin에 의해서 결합합니다. 그리고 HRP substrate solution 을 넣었을 때 Fluorescein-antibody복합체에 있는 HRP에 의해서 TMV(HRP substrate)가 분해되면서 발색을 하게 되는데요....... 이때 probe의 5' 말단에 fluorescein 과 probe간의 결합형태(결합방식)의 차이에 의해서 Fluorescein-antibody복합체의 형성정도에 차이가 생길 수 있나요? 고수님들의 조언 기다리겠습니다. 즐거운 주말 되세요
  • ELISA
  • Fluorescein-antibody complex
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