2007-12-10
org.kosen.entty.User@7fdd7958
권오수(akan111)
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B16F10 cell을 이용하여 멜라닌 생성 저해시험을 하려고 합니다.
저는 이제 실험을 막 시작한 초보이구요..
cell에 bample을 처리하고 24시간 배양후에
cell을 havest하여 pellet 색 확인 후
1N NAOH 100ul를 pellet에 넣고 1시간 incubation한 후
405nm에서 흡광도를 측정하는 과정입니다.
그런데 멜라닌 생성이 잘 안되는지 색 차이도 없고 그렇던데..
질문들 중에 a-MSH를 처리하라고 하시던데요..
언제처리를 해야하는지 모르겠습니다.
- B16F10
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답변 5
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답변
최성원님의 답변
2007-12-10- 0
저희 랩도 멜라닌 생성 저해 실험을 하는데요. 보통 seed 해노쿠선 하루뒤에 샘플 처리를 합니다. 이때 a-MSH를 처리를 합니다. 샘플도 마찬가지구요. 그리고 이틀더 키워서 (배지도 갈아주고 합니다.) 총 4일정도 걸리는걸로 알고 있습니다. -
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최성원님의 답변
2007-12-11- 0
먼저 첫째날 cell seeding을 합니다. 둘쨋날 먼저 배지를 갈아줍니다. 그다음 a-MSH(농도는 200nM 정도) 는 melanin 생성을 촉진하는것이므로 negative control로 사용하고요 arbutin은 melanin을 저해하므로 positive control로 사용하고 있습니다. (저희랩기준) 위의 두개중 하나를 일반적으로 control로 사용하구요. 질문주신분이 원하는 샘플을 다른 cell에다가 sample treatment를 하십됩니다. 그리고 이틀뒤 즉 4일째 되는날에 melanin assay를 하시거나 MTT assay를 하심됩니다. -
답변
권오수님의 답변
2007-12-11- 0
먼저 답변 감사드립니다. 그런데 a-MSH의 농도를 200nM~1000nM로 하라고 하시는데, 이농도가 맞는지... 어떤 농도로 실험을 하시는지요.. 그리고, sample과 함께 처리하라는 말씀이시죠? 그리고 sampleing 후에 배지를 갈아주시는것입니까?? -
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권오수님의 답변
2007-12-21- 0
감사합니다. 그런데 sample과 같이 처리할때 어느 정도의 요량을 첨가해야 하는 것 입니까??? -
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최성원님의 답변
2007-12-22- 0
> B16F10 cell을 이용하여 멜라닌 생성 저해시험을 하려고 합니다. > > 저는 이제 실험을 막 시작한 초보이구요.. > > cell에 bample을 처리하고 24시간 배양후에 > > cell을 havest하여 pellet 색 확인 후 > > 1N NAOH 100ul를 pellet에 넣고 1시간 incubation한 후 > > 405nm에서 흡광도를 측정하는 과정입니다. > > 그런데 멜라닌 생성이 잘 안되는지 색 차이도 없고 그렇던데.. > > 질문들 중에 a-MSH를 처리하라고 하시던데요.. > > 언제처리를 해야하는지 모르겠습니다. > >