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cellulase activity측정 방법 질문 (filter paper assay)

2007-12-17 org.kosen.entty.User@2b445b0f 김석(karam81)
  • 2
Cellulase의 활성을 측정하고 싶어 filter paper assay에 관한 논문을 읽고 실험을 수행하려 하고 있습니다. 그런데 논문에서 제시한 프로토콜에서 이해가 안돼는 부분이 많습니다. 프로토콜을 살펴보면 첫번째로 Add 0.05M Na-citrate, pH 4.8, to a test tube of volume at least 25ml. 이란 문구가 보이는 데요... 말 그대로 pH 4.8의 Na-citrate sol.을 1ml 주입하라는 건가요? 그런데 실제로 0.05M의 Na-citrate sol.의 pH를 측정해보니 8.3정도가 나오는데 제가 먼가 잘못한건가요?... Unit calculation에 대해서도 FPU = {0.37/(enzyme concentration to release 2.0mg glucose)} units/ml 이라고 정의해 놨는데.... 실험에 따라 2.0mg의 glucose가 생성된 enzyme concentration을 얻었다면 여기에 넣어 계산한 값(우항값)이 활성도인가요?? FPU의 단위를 쓰려면 다시 계산을 해줘야 할 거 같은데...이 식이 잘 이해가 안갑니다. 에휴...두서없이 써서 어째 질문 사항이 잘 전달이 안될지도 모르겠네요... 초짜라서 이래저래 고생하고 있습니다. 도와주시면 감사하겠습니다.^^
  • cellulase
  • activity
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답변 2
  • 답변

    박윤희님의 답변

    2007-12-17
    • 0
    첫번째 질문에 대한 답은 프로토콜의 일부만 발췌하여 정확하게는 모르겠네요. 두번재 질문은 Na-citrate를 녹인 뒤에 citric acid로 pH를 맞춰줘야할것 같은데요. 한문장만 가지고 뭐라 말씀 드리기가 뭣하네염.... 별 도움이 못된것 같아 죄송,...
    답변수정
    첫번째 질문에 대한 답은 프로토콜의 일부만 발췌하여 정확하게는 모르겠네요. 두번재 질문은 Na-citrate를 녹인 뒤에 citric acid로 pH를 맞춰줘야할것 같은데요. 한문장만 가지고 뭐라 말씀 드리기가 뭣하네염.... 별 도움이 못된것 같아 죄송,...
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  • 답변

    장성재님의 답변

    2007-12-17
    • 0
    >Cellulase의 활성을 측정하고 싶어 filter paper assay에 관한 논문을 읽고 실험을 수행하려 하고 있습니다. 그런데 논문에서 제시한 프로토콜에서 이해가 안돼는 부분이 많습니다. >프로토콜을 살펴보면 첫번째로 Add 0.05M Na-citrate, pH 4.8, to a test tube of volume at least 25ml. 이란 문구가 보이는 데요... >말 그대로 pH 4.8의 Na-citrate sol.을 1ml 주입하라는 건가요? >그런데 실제로 0.05M의 Na-citrate sol.의 pH를 측정해보니 8.3정도가 나오는데 제가 먼가 잘못한건가요?... Sodium citrate solution을 직접 사용하시는 것이 아니라 citric acid와 Na-citrate를 이용하여 buffer를 만드신 후 그 버퍼를 사용하라는 것 입니다. 논문에는 citrate buffer라고 써있을 겁니다. pH 4.8의 0.05M citrate buffer를 1mL 사용하라는 말입니다. Citric acid가 약산이며, Na-citrate는 약 염기성 입니다. 따라서 buffer가 되는 것 이지요. >Unit calculation에 대해서도 >FPU = {0.37/(enzyme concentration to release 2.0mg glucose)} units/ml >이라고 정의해 놨는데.... >실험에 따라 2.0mg의 glucose가 생성된 enzyme concentration을 얻었다면 여기에 넣어 계산한 값(우항값)이 활성도인가요?? FPU의 단위를 쓰려면 다시 계산을 해줘야 할 거 같은데...이 식이 잘 이해가 안갑니다. >에휴...두서없이 써서 어째 질문 사항이 잘 전달이 안될지도 모르겠네요... >초짜라서 이래저래 고생하고 있습니다. 도와주시면 감사하겠습니다.^^ cellulase 활성을 측정하는 것과 일반적인 전분 분해 효소의 활성을 측정하는 것은 같은 개념입니다. 단지 기질을 cellulose (paper disc)를 사용하는 것 뿐 이지요. 환원당의 발색법을 이용한 DNS assay가 기본입니다. cellulose가 분해되면서 발생하는 환원당의 농도를 측정하여 역으로 분해력으로 표시하는 것이지요. 도움이 되셨는지?
    답변수정
    >Cellulase의 활성을 측정하고 싶어 filter paper assay에 관한 논문을 읽고 실험을 수행하려 하고 있습니다. 그런데 논문에서 제시한 프로토콜에서 이해가 안돼는 부분이 많습니다. >프로토콜을 살펴보면 첫번째로 Add 0.05M Na-citrate, pH 4.8, to a test tube of volume at least 25ml. 이란 문구가 보이는 데요... >말 그대로 pH 4.8의 Na-citrate sol.을 1ml 주입하라는 건가요? >그런데 실제로 0.05M의 Na-citrate sol.의 pH를 측정해보니 8.3정도가 나오는데 제가 먼가 잘못한건가요?... Sodium citrate solution을 직접 사용하시는 것이 아니라 citric acid와 Na-citrate를 이용하여 buffer를 만드신 후 그 버퍼를 사용하라는 것 입니다. 논문에는 citrate buffer라고 써있을 겁니다. pH 4.8의 0.05M citrate buffer를 1mL 사용하라는 말입니다. Citric acid가 약산이며, Na-citrate는 약 염기성 입니다. 따라서 buffer가 되는 것 이지요. >Unit calculation에 대해서도 >FPU = {0.37/(enzyme concentration to release 2.0mg glucose)} units/ml >이라고 정의해 놨는데.... >실험에 따라 2.0mg의 glucose가 생성된 enzyme concentration을 얻었다면 여기에 넣어 계산한 값(우항값)이 활성도인가요?? FPU의 단위를 쓰려면 다시 계산을 해줘야 할 거 같은데...이 식이 잘 이해가 안갑니다. >에휴...두서없이 써서 어째 질문 사항이 잘 전달이 안될지도 모르겠네요... >초짜라서 이래저래 고생하고 있습니다. 도와주시면 감사하겠습니다.^^ cellulase 활성을 측정하는 것과 일반적인 전분 분해 효소의 활성을 측정하는 것은 같은 개념입니다. 단지 기질을 cellulose (paper disc)를 사용하는 것 뿐 이지요. 환원당의 발색법을 이용한 DNS assay가 기본입니다. cellulose가 분해되면서 발생하는 환원당의 농도를 측정하여 역으로 분해력으로 표시하는 것이지요. 도움이 되셨는지?
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