2008-01-04
org.kosen.entty.User@18b9d8a3
서강식(sks1379)
- 1
첨부파일
저희 학교에 BD의 FACSCanto II가 최근에 들어와서 다른 assay들과
함께 Annexin V/PI stating을 setting하고 있습니다. 이제 슬슬
autocompensation과 제가 하는 compensation을 알아가고 있고 정확한
portion과 분석을 할 줄 알면 될 것 같습니다. Setting 개념으로 HeLa
세포에 taxol을 100 nM 처리하고 32시간 후에 harvest한 다음 Annexin V/
PI stating을 하였습니다. 그런데 육안으로 확인하였을 때는 과반수 이상
의 세포가 죽어있었는데 실제 data는 첨부 파일에서 보시는 것과 같이
taxol 처리군에서 cell death portion의 비율이 비교적 적게 나왔습니다.
물론 control보다는 높지만요. 해서 곰곰히 생각해보니 sample을 준비
할 때 최대한 cell에 충격이 가지 않도록 해야하는데 centrifugation 후
에 tapping만으로는 세포가 suspension이 잘 되지않아 yellow tip과
pipette을 이용해서 suspension해서 죽은 세포들이 많이 터져버린 것이
아닌가 싶습니다. 고수님들은 sample 준비시 어떻게 하시나요?? tip 끝을
잘라서 쓰시나요 아님 계속해서 tapping을 하시나요? 아님 다른 방법
이라도... 초보적인 질문이지만 sample 준비가 가장 중요한 step이기
때문에 여쭤봅니다. 한 수 가르쳐 주시기 바랍니다. 감사합니다. ^^
- Annexin V
- PI
- apoptosis
지식의 출발은 질문, 모든 지식의 완성은 답변!
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
답변 1
-
답변
장성재님의 답변
2008-01-04- 0
말씀하신 조건 (yellow pipetting)과 같이 실험을 하신 후에 세포를 FACs에 적용하시기 전에 형광 현미경으로 관찰을 해보시면 원인을 보다 확실히 파악하실 수 있을 겁니다. 염색이 잘 안되었을 가능성도 있으니.... 아니면, FACs data aquisition하실때 gate를 좀더 좁고 specific하게 설정을 해주시는 것도 한가지 방법이 될 수 있습니다. 그리고, pipetting에 의한 충격으로 cell들이 lysis된 것이 원인이라면, 가벼운 vortexing이 세포에 충격을 덜 줄것 같네요. tapping보다는 세포들을 잘 분산 시켜줄 겁니다. 물론 sample의 sieves는 하셨겠죠?