2008-01-13
org.kosen.entty.User@78b76044
이지혜(wisdomgirl)
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안녕하세요..
제가 지금 논문을 쓰는 과정에서 Invertase를 생성 못하는 S.cerevisiea.에 Sucrose binding Protein 을 pDR 195 Plasmid를 이용하여 Transformation을 했는데요..
이 Gen이 Yeast 내에서 발현 하는지 알고 싶은데 방법을 찾지 못하겠네요...좋은 방법 떠오르시는분 좀 가르쳐주세요...
감사합니다.
- Sucrose binding Protein
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 3
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답변
장성재님의 답변
2008-01-15- 0
>안녕하세요.. >제가 지금 논문을 쓰는 과정에서 Invertase를 생성 못하는 S.cerevisiea.에 Sucrose binding Protein 을 pDR 195 Plasmid를 이용하여 Transformation을 했는데요.. >이 Gen이 Yeast 내에서 발현 하는지 알고 싶은데 방법을 찾지 못하겠네요...좋은 방법 떠오르시는분 좀 가르쳐주세요... >감사합니다. 우선 목적하신 유전자가 삽입된 yeast를 벡터 상의 selection marker를 이용하여 선별하시지 않으셨는지 묻고 싶습니다. 또한 목적하신 단백질에 tag 등이 달려있지는 않는지 묻고 싶습니다. 아니면 선별하실 목적으로 위와 같은 질문을 하신 경우라면 아래의 내용을 참고하시길 바랍니다. 어떤 종 유래의 sucrose binding protein에 관한 연구를 하시는 지 모르겠습니다만, 관련 자료를 검색해 본 결과 a secreted-invertase-deficient mutant yeast strain에 sucrose binding protein을 발현시키는 경우가 님께서 하시는 연구와 관련될 것 같습니다. secreted-invertase-deficient mutant yeast strain의 경우 sucrose binding protein이 없는 경우 sucrose의 세포 내 전달이 차단되어 유일한 탄소원이 sucrose인 배지에서의 생육이 불가능하다고 합니다. 따라서 목적하시는 sucrose binding protein이 yeast에서 발현된 경우 선별 배지에서의 생육이 변화할 것으로 사료됩니다. -
답변
이지혜님의 답변
2008-01-15- 0
>안녕하세요.. >제가 지금 논문을 쓰는 과정에서 Invertase를 생성 못하는 S.cerevisiea.에 Sucrose binding Protein 을 pDR 195 Plasmid를 이용하여 Transformation을 했는데요.. >이 Gen이 Yeast 내에서 발현 하는지 알고 싶은데 방법을 찾지 못하겠네요...좋은 방법 떠오르시는분 좀 가르쳐주세요... >감사합니다. 우선 목적하신 유전자가 삽입된 yeast를 벡터 상의 selection marker를 이용하여 선별하시지 않으셨는지 묻고 싶습니다. 또한 목적하신 단백질에 tag 등이 달려있지는 않는지 묻고 싶습니다. 물론 selection marker는 있습니다.Uracil mutant를 이용하기 때문에 제가 사용한 백토에 Uracil gen을 삽입하였습니다. tag은 달려있지 않습니다.. 아니면 선별하실 목적으로 위와 같은 질문을 하신 경우라면 아래의 내용을 참고하시길 바랍니다. 어떤 종 유래의 sucrose binding protein에 관한 연구를 하시는 지 모르겠습니다만, 관련 자료를 검색해 본 결과 a secreted-invertase-deficient mutant yeast strain에 sucrose binding protein을 발현시키는 경우가 님께서 하시는 연구와 관련될 것 같습니다. secreted-invertase-deficient mutant yeast strain의 경우 sucrose binding protein이 없는 경우 sucrose의 세포 내 전달이 차단되어 유일한 탄소원이 sucrose인 배지에서의 생육이 불가능하다고 합니다. 따라서 목적하시는 sucrose binding protein이 yeast에서 발현된 경우 선별 배지에서의 생육이 변화할 것으로 사료됩니다. 잘못 생각하신것 같은데요.. Yeast에서 Invertase가 고장난 경우에선 sucrose 배지에서 자랄수 있는 방법은 없습니다. Yeast의 경우 보통 Glucose배지에서 자랄수 있는데 Yeast의 Invertase가 제대로 작동하는 경우에는 sucrose binding protein 없이도 sucrose배지에서 자랄수 있습니다. Invertase가 sucrose를 glucose하고 fructose로 자르기 때문이죠...보통 Invertase는 세포막 밖에 존재하니까요.. 문제는 제가 사용하는 yeast는 Invertase가 없는 경우이고 sucrose binding protein은 그저 sucrose가 세포내 전달만 할 뿐이라는 거죠. 그래서 이 gen이 제대로 발현 하는지 알수 있는 방법이 없단거죠.. 물론 Transformation 된건 Uracil 없는 배지에서 확인했습니다.. 도움을 주시면 좋겠네요..생물쪽에 많은 지식이 있으신것 같은데...도움을 더 못주시더라도 감사한 마음 ^^ -
답변
장성재님의 답변
2008-01-16- 0
첨부한 논문을 참고하시면 도움이 되실 것 같습니다.