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western blotting 하려고 합니다.

biorad에서 Vertical Electrophoresis 기기를 샀구요 이제 시약을 사려고 하는데요 사람들이 많이 쓰는 시약이 있나요? 종류가 좀 있어서 골라써야 한다고 하더라구요 그게 premix 시약이라던데요 혹시 biorad에서 쓰시는 시약들이 있다면 좀 알려주셔요.. 참 그리고 protein extract하는 protocol이랑 시약도 아시면 좀 알려주세요
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    박재봉님의 답변

    >biorad에서 Vertical Electrophoresis 기기를 샀구요 > >이제 시약을 사려고 하는데요 >사람들이 많이 쓰는 시약이 있나요? >종류가 좀 있어서 골라써야 한다고 하더라구요 >그게 premix 시약이라던데요 > >혹시 biorad에서 쓰시는 시약들이 있다면 좀 >알려주셔요.. > >참 그리고 protein extract하는 protocol이랑 시약도 아시면 >좀 알려주세요 한번 해 보시면 쉽지만 처음 해 보시는 분들께는 설명만 들어서는 쉽지 않을 겁니다. 가장 좋은 방법은 한번 다른 사람들이 하는 것을 보시는 방법입니다. 1) 전기영동: acrylamide/bisacrylamide 용액을 만들고 (혹은 구입하시고), 완충액 조성은 참고문헌을 찾아보세요. 2) 단백질의 transfer: 단백질을 PVDF 막으로 이동시키기 위하여 transfer 용 module을 사셔야 합니다. 완충액과 조건은 논문 들을 참고 하세요. PVDF 막도 구입하세요. 3)Antibody: 목적에 맞는 것들을 구입하세요. 이차 항체와 chemiluminescednce를 발광하는 ECL 용액 (Amersham 제품) 을 구입하세요.
    >biorad에서 Vertical Electrophoresis 기기를 샀구요 > >이제 시약을 사려고 하는데요 >사람들이 많이 쓰는 시약이 있나요? >종류가 좀 있어서 골라써야 한다고 하더라구요 >그게 premix 시약이라던데요 > >혹시 biorad에서 쓰시는 시약들이 있다면 좀 >알려주셔요.. > >참 그리고 protein extract하는 protocol이랑 시약도 아시면 >좀 알려주세요 한번 해 보시면 쉽지만 처음 해 보시는 분들께는 설명만 들어서는 쉽지 않을 겁니다. 가장 좋은 방법은 한번 다른 사람들이 하는 것을 보시는 방법입니다. 1) 전기영동: acrylamide/bisacrylamide 용액을 만들고 (혹은 구입하시고), 완충액 조성은 참고문헌을 찾아보세요. 2) 단백질의 transfer: 단백질을 PVDF 막으로 이동시키기 위하여 transfer 용 module을 사셔야 합니다. 완충액과 조건은 논문 들을 참고 하세요. PVDF 막도 구입하세요. 3)Antibody: 목적에 맞는 것들을 구입하세요. 이차 항체와 chemiluminescednce를 발광하는 ECL 용액 (Amersham 제품) 을 구입하세요.
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    손은정님의 답변

    >biorad에서 Vertical Electrophoresis 기기를 샀구요 > >이제 시약을 사려고 하는데요 >사람들이 많이 쓰는 시약이 있나요? >종류가 좀 있어서 골라써야 한다고 하더라구요 >그게 premix 시약이라던데요 > >혹시 biorad에서 쓰시는 시약들이 있다면 좀 >알려주셔요.. > >참 그리고 protein extract하는 protocol이랑 시약도 아시면 >좀 알려주세요 > > Protein extract 하는 protocol이라고 하시면 animal cell 수준에서 말씀하시는 건지 잘 모르겠지만 일반적인 cell 수주에서는 저는 RIPA buffer을 사용합니다. 시중에도 많이 판매가 되니 검색하시면 쉽게 찾으실 것 같네요. 그리고 기본적인 western blot protocol을 첨부해요. 저두 어디서 얻었던 파일인지는 기억이 가물하지만요. 첨부된 거에 필요한 시약들은 biorad에서 많이 팔아요. 도움이 될런지 모르겠네요
    >biorad에서 Vertical Electrophoresis 기기를 샀구요 > >이제 시약을 사려고 하는데요 >사람들이 많이 쓰는 시약이 있나요? >종류가 좀 있어서 골라써야 한다고 하더라구요 >그게 premix 시약이라던데요 > >혹시 biorad에서 쓰시는 시약들이 있다면 좀 >알려주셔요.. > >참 그리고 protein extract하는 protocol이랑 시약도 아시면 >좀 알려주세요 > > Protein extract 하는 protocol이라고 하시면 animal cell 수준에서 말씀하시는 건지 잘 모르겠지만 일반적인 cell 수주에서는 저는 RIPA buffer을 사용합니다. 시중에도 많이 판매가 되니 검색하시면 쉽게 찾으실 것 같네요. 그리고 기본적인 western blot protocol을 첨부해요. 저두 어디서 얻었던 파일인지는 기억이 가물하지만요. 첨부된 거에 필요한 시약들은 biorad에서 많이 팔아요. 도움이 될런지 모르겠네요
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    이유진님의 답변

    >biorad에서 Vertical Electrophoresis 기기를 샀구요 > >이제 시약을 사려고 하는데요 >사람들이 많이 쓰는 시약이 있나요? >종류가 좀 있어서 골라써야 한다고 하더라구요 >그게 premix 시약이라던데요 > >혹시 biorad에서 쓰시는 시약들이 있다면 좀 >알려주셔요.. > >참 그리고 protein extract하는 protocol이랑 시약도 아시면 >좀 알려주세요 > > 위분들이 답변을 잘 해주셔서 총괄적인 것은 생략하도록하겠습니다. 저의 방은 western을 수없이 하는 방이라 kit가격이 엄두가 안나서 사용하지 못하고 있지만, transfer하실때 invitrogen에서 나온 iblot을 추천합니다. 통상 wet방식과 semi-wet방식이 있는데 시간과 시약이 많이 드는 반면iblot은 단 7분만에 transfer가 끝납니다. 대량으로 western을 하지 않는 랩이라면 적극 권장해드리고 싶네요
    >biorad에서 Vertical Electrophoresis 기기를 샀구요 > >이제 시약을 사려고 하는데요 >사람들이 많이 쓰는 시약이 있나요? >종류가 좀 있어서 골라써야 한다고 하더라구요 >그게 premix 시약이라던데요 > >혹시 biorad에서 쓰시는 시약들이 있다면 좀 >알려주셔요.. > >참 그리고 protein extract하는 protocol이랑 시약도 아시면 >좀 알려주세요 > > 위분들이 답변을 잘 해주셔서 총괄적인 것은 생략하도록하겠습니다. 저의 방은 western을 수없이 하는 방이라 kit가격이 엄두가 안나서 사용하지 못하고 있지만, transfer하실때 invitrogen에서 나온 iblot을 추천합니다. 통상 wet방식과 semi-wet방식이 있는데 시간과 시약이 많이 드는 반면iblot은 단 7분만에 transfer가 끝납니다. 대량으로 western을 하지 않는 랩이라면 적극 권장해드리고 싶네요
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