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HPLC를 사용하요 Nova- C18 column 사용하여 실험을 하고 있습니다.

HPLC를 사용하요 Nova- C18 column 사용하여 실험을 하고 있습니다. 이동상은 물과 메탄올을 사용하여 gradient를 100 % : 0% --> 0% : 100%로 약70분정도로 하여 실험을 하고 있습니다. 제가 원하는 물질이 물 99%에서 두개가 같이 뭉쳐서 나오는데 이럴때 두개의 peak를 분리할수 있는 방법이 있나요?? 참고로 아직 여러 실험을 수행해본 결과 클로로포름 핵산 에틸아세테이트와 같은곳에서는 거의 solubility가 거의 없었습니다. 그래서 silica를 사용하지 못하고 있구요. 어떻게 해야되는지 좋은 방법있으면 고수님들의 좋은 충고 기다리겠습니다.
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답변 1
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    이상후님의 답변

    >HPLC를 사용하요 Nova- C18 column 사용하여 실험을 하고 있습니다. > >이동상은 물과 메탄올을 사용하여 gradient를 100 % : 0% --> 0% : 100%로 약70분정도로 하여 > >실험을 하고 있습니다. > >제가 원하는 물질이 물 99%에서 두개가 같이 뭉쳐서 나오는데 이럴때 두개의 peak를 분리할수 > >있는 방법이 있나요?? > >참고로 아직 여러 실험을 수행해본 결과 클로로포름 핵산 에틸아세테이트와 같은곳에서는 거의 > >solubility가 거의 없었습니다. 그래서 silica를 사용하지 못하고 있구요. > >어떻게 해야되는지 좋은 방법있으면 고수님들의 좋은 충고 기다리겠습니다. 우선 분리하고자 하는 물질이 단백질인지 탄수화물계통인지에 따라서 컬럼과 이동상 조건이 다를 수 있습니다. 물 99%에서 나온다는 것은 상당히 친수성(알코올에 부분적인 용해도가 있는)에 성질이 있는거 같군요. 반드시 C18 column을 사용해야 되는건가요? 그렇지 않다면 amine column을 사용해 보라구 권하구 싶군요. 만약 ODS column을 계속 사용해야 된다면 solvent를 물과 아세토나이트릴로 바꿔서 해보세요.
    >HPLC를 사용하요 Nova- C18 column 사용하여 실험을 하고 있습니다. > >이동상은 물과 메탄올을 사용하여 gradient를 100 % : 0% --> 0% : 100%로 약70분정도로 하여 > >실험을 하고 있습니다. > >제가 원하는 물질이 물 99%에서 두개가 같이 뭉쳐서 나오는데 이럴때 두개의 peak를 분리할수 > >있는 방법이 있나요?? > >참고로 아직 여러 실험을 수행해본 결과 클로로포름 핵산 에틸아세테이트와 같은곳에서는 거의 > >solubility가 거의 없었습니다. 그래서 silica를 사용하지 못하고 있구요. > >어떻게 해야되는지 좋은 방법있으면 고수님들의 좋은 충고 기다리겠습니다. 우선 분리하고자 하는 물질이 단백질인지 탄수화물계통인지에 따라서 컬럼과 이동상 조건이 다를 수 있습니다. 물 99%에서 나온다는 것은 상당히 친수성(알코올에 부분적인 용해도가 있는)에 성질이 있는거 같군요. 반드시 C18 column을 사용해야 되는건가요? 그렇지 않다면 amine column을 사용해 보라구 권하구 싶군요. 만약 ODS column을 계속 사용해야 된다면 solvent를 물과 아세토나이트릴로 바꿔서 해보세요.
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