2008-01-22
org.kosen.entty.User@7cd1e2f4
박선영(pgene)
- 3
안녕하세요.
제가 지금 곤충세포인 high-five cell을 배양하고 있습니다.
그런데 이상하게도 60~70%정도만 차면 cell이 바닥에서 덩어리가 진채
자꾸 떨어집니다.
원래 이 cell이 바닥에 붙어 자라는 cell이라고 알고 있고, 꽉 찼을때
계대를 해 주면 되며, 오히려 꽉 차면 바닥에 더 잘 붙는다고 들었는데
자꾸 바닥에서 떨어지네요.
cell 배양도 안해봤지만, 곤충세포에 대해서 더욱 모르기에
혹시 high-five cell 배양에 대해서 잘 아시는 분이 계시다면
답변 부탁드립니다.
급합니다..
그리고 이럴 경우 어떤 변화를 주어야 cell이 잘 자랄지...
cell에 대한 정보와 배양 방법 그리고 제가 어떤 실수를 했을지..
이런저런 아시는대로 정확한 정보 부탁드립니다.
그리고 cell은 사서 처음 푼 cell을 배양중입니다. 풀은지 일주일 되었구요.
부탁드립니다.
- insect
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답변 3
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답변
장성재님의 답변
2008-01-23- 0
님께서 현재 사용하시는 배지의 종류는 어떤 것입니까? 님께서 말씀하신 상태를 고려해 볼때 배지가 suspension culture용이 아닐까 하는 생각이 드네요. 주로 High-Five의 경우는 vaculovirus를 이용한 재조합 단백질의 생산에 사용하는 insect cell line으로 현재 대부분 고농도 배양을 위한 suspension culture용 배지들이 개발되어 있는 실정입니다. 우선 사용하시는 배지를 확인해 보시길 바랍니다. -
답변
박선영님의 답변
2008-01-23- 0
제가 사용하고 있는 배지는 Express Five SFM 1L(GIBCO) + L-Glutamin 90ml을 mix한 배지를 사용하고 있습니다. cell을 구입해서 푼지 일주일 되었고, 한번 뭉쳐서 떨어진 적이 있어서 다시 붙였는데 80%이상되니 또 다시 같은 증상으로 cell이 다 떨어졌네요. 어떻게 배양을 해야할지..혹시 배지에 문제가 있나요? 이 cell은 serum을 넣지 않는 것으로 알고 있는데 혹시 넣어서 계대를 해야하는건가요? 그리고 온도에 민감한 cell인지요? 배양기가 외부 환경에 영향을 많이 받는지 27도에 맞춰놔도 25~27도 에서 왔다 갔다 하는데..이것에 문제인지요? 아시는분...급합니다~ 부탁드려요. -
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장성재님의 답변
2008-01-23- 0
제가 아는 지식 하에서 insect cell line은 대부분 adherent-independent입니다. 즉, 부유 배양이 가능합니다. Invitrogen의 홈페이지에 들어가셔서 카달로그를 확인해보세요. 님께서 사용하고 계신 Express Five SFM는 serum-free이며, suspension용으로 재조합 단백질 생산용 배지입니다. monolayer culture가 가능하다고 나와 있기는 합니다만, Express Five SFM배지에서는 님께서 확인하셨듯이 70-80% confluency가 되면 cell clotting이 발생합니다. 일부러 Express Five SFM를 이용하여 suspension용 배지에 세포를 적응시키기 위해 사용하기도 합니다만 이때에는 spinner flask를 이용하셔서 shaking 배양을 하셔야 할 듯 싶군요. 설명서를 첨부합니다. 자세히 확인해 보신 후 사용하시길...