2008-01-25
org.kosen.entty.User@607cbb87
강명주(kmj0856)
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Liposome에 fluorescence conjugated antibody를 봉입하려 합니다.
이때 liposome 내로 봉입되지 fluorescence conjugated antibody를 제거하려고합니다.
문헌을 공부한 바로는 Sephadex를 이용하여 liposome과 antibody를 분리하고 있었습니다.
굉장히 다양한 Sephadex 중에 어떤 것을 사용하는 것이 좋을지 감이 안잡히네요..
사용가능한 Sephadex에는 어떤 것이 있는지, 그리고 최대한 간단하게 특히 pre-packed
colume 중에서 추천해 주시면 감사하겠습니다. 그리고 일정한 유속으로 흘려주기 위해 pump가 필
요하다고 하는데 어떻게 하는건지..제가 문외한이라 질문이 많네요...
부탁드립니다.
- Sephadex
- Liposome
- antibody
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 4
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답변
이풍석님의 답변
2008-01-25- 0
>Liposome에 fluorescence conjugated antibody를 봉입하려 합니다. > >이때 liposome 내로 봉입되지 fluorescence conjugated antibody를 제거하려고합니다. > >문헌을 공부한 바로는 Sephadex를 이용하여 liposome과 antibody를 분리하고 있었습니다. > >굉장히 다양한 Sephadex 중에 어떤 것을 사용하는 것이 좋을지 감이 안잡히네요.. > >사용가능한 Sephadex에는 어떤 것이 있는지, 그리고 최대한 간단하게 특히 pre-packed > >colume 중에서 추천해 주시면 감사하겠습니다. 그리고 일정한 유속으로 흘려주기 위해 pump가 필 > >요하다고 하는데 어떻게 하는건지..제가 문외한이라 질문이 많네요... > >부탁드립니다. Sephadex의 종류 및 원리는 위에 설명하셨으니 생략하겠습니다. 관련 정보 및 기술은 GE Healthcare에 연락하시면 지원을 받으실 수 있습니다. 콜센터(02-3015-6303)로 문의하시면 되구요 아래는 GE Healthcare 한국 홈페이지구요. http://www6.gelifesciences.com/aptrix/upp01077.nsf/Content/korea_homepage 제품 구매는 서울지역은 남북으로 담당하는 대리점이 다르다고 합니다. 북쪽은 기억이(?), 남쪽은 동일과학에서 판매하는 것으로 알고 있습니다. 자세한 정보 또는 카탈로그는 위 홈페이지나 동일과학 홈페이지에서 구할 수 있습니다. 제 경험상 분리(제거 하려는 물질에 따라 다르지만) 중력으로 분리해도 시간이 많이 소요되지는 않았습니다만, 물론 펌프를 이용하는 것과 비교는 안되겠지만, 대략 5~10분 이내에 가능했던 것 같습니다. <- 이 또한 컬럼의 길이, 분리하려는 물질의 종류 등 상황에 따라 달라질 수 있습니다. 마지막으로 pre-packed column은 sephadex G-25가 있습니다. -
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장성재님의 답변
2008-01-25- 0
항체를 리포좀 내로 포집하시길 원하시는 것인지 아니면 항체에 PE 등을 conjugation하신 후 target-sensitive liposome을 만든 것인지 궁금하군요. 항체를 리포좀 내로 포집하는 것은 그다지 쉬운 작업은 아닐 겁니다. 포집율도 많이 떨어질 것이고...리포좀의 사이즈 등도 문제가 될 수 있습니다. 후자의 경우라면 좀더 간단할 것 같은데요. 참고 문헌이 꽤 많이 있을 겁니다. 먼저 분이 설명해 주신 데로 gel exclusion chromatography로 분리 하실 수 있을 겁니다. 그러나 역시 원하시는 리포좀 복합체와 여분의 항체를 분리하실려면 분자량 등을 예측하신 및 예비 실험이 필요할 겁니다. 잘 아시다시피 항체를 형광 물질로 라벨링한 후 분리하는 데에는 주로 Sephadex G-25 나 G-50이면 충분히 분리가 가능합니다. 이때는 비교적 저분자의 형광물질과 항체이기 때문에 쉽게 분리가 됩니다만 님의 실험에도 같은 것을 적용할 수 있을 지는.... -
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이상후님의 답변
2008-01-25- 0
Liposome과 antibody를 분리하는 방법으로 가장 광범위하게 사용되고 있는 것이 size exclusion chromatography입니다. 예를 들어 column material로서 Sepharose 2B, 4B Sephacryl S-1000, Sephadex G series 그리고 high performance exclusion gels인 TSK-PW series가 사용됩니다. Pre-packed column은 보통 commercial하게 구입하실 수 있거나 아니면 실험자가 간단하게 resin을 구입해서 직접 충진해서 사용할 수 도 있습니다. 충진은 그다지 어려운건 아닙니다. 그리고 liposome 내로 봉입되지 않은 fluorescence conjugated antibody를 컬럼을 이용해서 제거할 때는 중력을 이용하여 펌프없이 사용하기도 하나 시간이 좀 오래 걸릴 수 있습니다. 그래서 peristalic pump를 사용하기도 합니다. 펌프 사용은 컬럼 용출구쪽에 실리콘 튜브를 연결하고 펌프를 통해 작동해주면 일정한 유속으로 흘러나오게 됩니다. 펌프도 쉽게 구입 가능합니다. Fluorescence conjugated antibody의 경우는 가시광선영역에서 색깔을 띄게 되므로 중력을 이용하여 Sephadex로 충진된 컬럼상에서 빠져나오는 것을 관찰할 수 있습니다. 물론 리포좀들과는 retention time의 차이로 분리가 될 것입니다. -
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안길홍님의 답변
2010-01-26- 0
>Liposome에 fluorescence conjugated antibody를 봉입하려 합니다.>>이때 liposome 내로 봉입되지 fluorescence conjugated antibody를 제거하려고합니다.>>문헌을 공부한 바로는 Sephadex를 이용하여 liposome과 antibody를 분리하고 있었습니다.>>굉장히 다양한 Sephadex 중에 어떤 것을 사용하는 것이 좋을지 감이 안잡히네요..>>사용가능한 Sephadex에는 어떤 것이 있는지, 그리고 최대한 간단하게 특히 pre-packed >>colume 중에서 추천해 주시면 감사하겠습니다. 그리고 일정한 유속으로 흘려주기 위해 pump가 필>>요하다고 하는데 어떻게 하는건지..제가 문외한이라 질문이 많네요...>>부탁드립니다. 첨부자료