2008-01-25
org.kosen.entty.User@2dbb6ee6
김수아(tndk79)
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안녕하십니까?
실험을 하다가 궁금한것이 있어서 여쭤봅니다.
주로 in vivo 실험을 맡고있는데,
조직을 갈아서 western 을 하던중,
유독 이번 sample 은 b-actin 이 잘 나오지 않습니다.
보통 western 을 하여 b-actin 을 보는 경우는 protein 정량후에,
보정이 잘 되어있는지 보기위하여 저희 lab 에서는 b-actin 을 붙여서
각 sample 당 동량의 protein 을 갖고 있는지 확인을 합니다.
lab 마다 b-actin 을 보는 이유는 거의 비슷하다고 알고 있습니다.
protein 정량도 ELASA 을 통해서 하여, 거의 보정을 완벽히 했는데도
불구하고, b-actin 이 동량으로 잘 안나오는 경우도 간혹 있는지
궁금합니다.
- actin
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답변 1
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답변
장성재님의 답변
2008-01-25- 0
실험하시는 조직에 따라서 그리고 물론 실험 조건에 따라서 베타-액틴을 내부 표준으로 사용할 수 없을 수도 있답니다. 최근의 보고들에 의하면 베타-액틴도 꽤나 스트레스나 신호 전달계의 움직임에 따라서 변화하는 것으로 알려져 있으므로....다른 내부 표준들도 마찬가지라고 할 수 있습니다. 우선 같은 샘플을 이용하여 내부 표준을 GAPDH나 Tublin으로 바꿔서 시도해 보시는 방법도 있으나, 특히 세포나 셀라인이 아닌 조직을 이용해서 단백질을 총 단백질을 추출하시는 경우에는 추출 방법에 따라서 차이가 발생하기도 한답니다.