지식나눔

gel zymography 방법에 대해 알려주세요~

gel zymography를 통해 MMP-9의 활성도를 측정하고자 합니다. media sup를 따서 1% gelatin이 들어가있는 10% glycine gel에 넣어 전기영동 후 Coomassie staining을 하였는데 positive control도 activity가 안나오네요. 혹시 media sup을 loading할때 WB gel loading buffer를 넣어주어야 하나요? 전 안넣어준 상태로 그대로 media sup만 loading을 하였습니다. 고수님들, 가르쳐주세요~ 읽어주셔서 감사합니다.
  • MMP-9
  • gelatinase
  • gelatinase activity
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답변 1
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    박현님의 답변

    저는 조금 다른 zymography를 하고 있는데요.. 그때도 일반적인 PAGE를 하는 것처럼 loading buffer를 처리해줍니다. 물론 일반적인 PAGE의 loading buffer와는 다른 조성이지만요.. 논문에 내용을 찾아보시면 loading buffer의 조성이 나올거예요.. 자료 찾아보시고요.. 실험 잘 되시길 바랄게요.. >gel zymography를 통해 MMP-9의 활성도를 측정하고자 합니다. >media sup를 따서 1% gelatin이 들어가있는 10% glycine gel에 넣어 전기영동 후 Coomassie staining을 하였는데 positive control도 activity가 안나오네요. >혹시 media sup을 loading할때 WB gel loading buffer를 넣어주어야 하나요? >전 안넣어준 상태로 그대로 media sup만 loading을 하였습니다. >고수님들, 가르쳐주세요~ >읽어주셔서 감사합니다.
    저는 조금 다른 zymography를 하고 있는데요.. 그때도 일반적인 PAGE를 하는 것처럼 loading buffer를 처리해줍니다. 물론 일반적인 PAGE의 loading buffer와는 다른 조성이지만요.. 논문에 내용을 찾아보시면 loading buffer의 조성이 나올거예요.. 자료 찾아보시고요.. 실험 잘 되시길 바랄게요.. >gel zymography를 통해 MMP-9의 활성도를 측정하고자 합니다. >media sup를 따서 1% gelatin이 들어가있는 10% glycine gel에 넣어 전기영동 후 Coomassie staining을 하였는데 positive control도 activity가 안나오네요. >혹시 media sup을 loading할때 WB gel loading buffer를 넣어주어야 하나요? >전 안넣어준 상태로 그대로 media sup만 loading을 하였습니다. >고수님들, 가르쳐주세요~ >읽어주셔서 감사합니다.
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