2008-01-31
org.kosen.entty.User@527e6da0
조영래(unitedcam)
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현재 AS를 정제하고 있습니다.
cell을 깨고 난 후 filtering을 하잖아요
지금은 filtering 할때 0.45㎛ syringe filter를 이용해서 하고 있습니다.
근데 이것이 5㎖만 하면 filter가 막혀서 할 수가 없어요.
500㎖을 해야 하는데..
좋은 방법 없는지 좀 가르쳐 주세요
혹시 JH용 0.45㎛ membrane filter를 써도 괜찮을까요?
- enzyme purification
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 2
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답변
장성재님의 답변
2008-01-31- 0
원심분리를 하시는 것은 어떨지요? 10,000 - 15,000 g정도에서 30분 가량 원심분리를 해주시면 cell debris와 supernatant가 쉽게 분리될 겁니다. 원심 분리 전 detergent나 Nuclease를 처리 해 주시는 것도 좋습니다. membrane filtering만으로 bacterial cell lysate를 분리하는 것은 무리가 있군요. 혹시 목적 단백질이 inclusion body를 형성한다면 cell debris를 inclusion body 전용 lysis buffer에 다시 용해 후 다음 절차를 밟으시는 것이 좋겠지요. -
답변
최기섭님의 답변
2008-02-01- 0
윗분의 말씀대로 우선 원심분리를 해서 cell debris를 분리하구요. Membrane filter는 size가 1.5 um정도 되는 것 부터 사용하시실 바랍니다. 1.5 um --> 0.8 um 한 후에 0.45 나 0.22로 하면 될거예요. Membrane filter는 Pall, Millipore나 Sartorius 에 size별로 모두 있습니다. 그리고, syringe filter이외에도 size가 큰 것 들도 있습니다. 500 mL을 syringe filter로 하기엔 무리가 있을 겁니다. <참고> filtering하기 전에 ammonium sulfate fractionation을 생각해 보셔도 좋을 듯합니다. Ammonium Sulfate 농도별로 조금씩 test해서 분리하면, bulk한 material을 처리하는데 많은 도움이 됩니다. 자세한 내용은 “Guide to protein purification“ Murray P. Deutscher 를 참고하세요.