2008-02-14
org.kosen.entty.User@71695553
이인태(biolit)
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제가 E.coli를 disruption 시키는 작업을 하는데 궁금한점이 있어서 이렇게 글을 올립니다.
EDTA를 사용하는 목적이나 적정 농도 범위가 어느 정도인지 정보를 알려주시겠어요
저는 BL21, BL21(DE3), W3110의 cell을 disruption 하는데 2.5mM EDTA를 사용하는데
어떤경우는 50mM EDTA를 사용하는 경우도 있더라고요
그래서, 더 높은 농도를 사용하면 좋은것인지도 알고 싶어서요.
즐거운 하루되시고.
새해 복 많이 받으세요.
- E.coli
- EDTA
- BL21
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답변 1
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답변
장성재님의 답변
2008-02-15- 0
잘 아시다시피 EDTA만을 이용해서 E.coli를 disruption시킬 수는 없습니다. lysozyme을 사용하거나 detergent를 이용한 alkali lysis 등의 방법으로 세포를 disruption 시킬 때 EDTA를 사용하는 것은 세포벽에 많이 존재하는 metal ion (Mg2+ 등)을 제거함으로 세포벽이 깨지기 쉽게하거나, cell lysis 후에 세포에 존재하는 metalloprotease 등의 분해 효소들의 활성을 저해하기 위해서가 아닐까 생각됩니다만... 위와 같은 목적으로 사용하는 EDTA의 적정 농도는 1-10mM 정도입니다. DNA관련 실험의 경우에는 DNase 등의 nuclease의 활성을 저해하기 위해서 100-500mM 정도의 고농도의 EDTA를 사용하는 경우도 있습니다. 아시다시피 EDTA의 주요한 기능은 chelating입니다. 단, 위와 같이 EDTA를 처리한 후에는 다음 단계의 실험에 EDTA가 영향을 미칠 경우 반드시 EDTA를 제거해 주어야만 합니다.