2008-02-20
org.kosen.entty.User@183d1b99
최훈성(hschoi77)
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protein 정제 후
western과 쿠마신 염색확인 결과
원하는 size와 정재 결과가 나와서
in vitro 실험에 접어들었습니다.
하지만 활성이 없습니다.
fusion protein에 대해 정제 후 처리방법 또는
정제 방법에 대해서 조언을 구하고자 합니다.
좀 도와 주십시오...ㅜ,.ㅜ
- protein
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답변 3
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답변
이지현님의 답변
2008-02-21- 0
>protein 정제 후 >western과 쿠마신 염색확인 결과 >원하는 size와 정재 결과가 나와서 >in vitro 실험에 접어들었습니다. > >하지만 활성이 없습니다. >fusion protein에 대해 정제 후 처리방법 또는 >정제 방법에 대해서 조언을 구하고자 합니다. > >좀 도와 주십시오...ㅜ,.ㅜ 단백질 정제 과정시 상온에서 했다면 활성이 없어질수도 있지요... 어떤 방법으로 정제했느냐에 따라 틀려집니다.... 그리고 어떤 정제 방법을 ？㎢윰커？따라서도 달라지는데.. 최대한 단백질은 냉장온도에서 해야 합니다... -
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최성원님의 답변
2008-02-21- 0
>protein 정제 후 >western과 쿠마신 염색확인 결과 >원하는 size와 정재 결과가 나와서 >in vitro 실험에 접어들었습니다. > >하지만 활성이 없습니다. >fusion protein에 대해 정제 후 처리방법 또는 >정제 방법에 대해서 조언을 구하고자 합니다. > >좀 도와 주십시오...ㅜ,.ㅜ Size로 한번 분리를 해보시구요. 간단하게 Centricon이나 아미콘같은걸로 (큰사이즈)는 왠만함 분리를 할수 있을겁니다. 다른방법은 Affinity 컬럼을 사용해보시는게 어떤지요?? 여러종류가 있겠지만.. 모든실험은 냉장에서(4도)에서 수행해보세요. -
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안선영님의 답변
2008-02-24- 0
protein정제를 어떻게 하셨는지 알려주지 않아서 정확히 말씀드리기가 어렵네요. 그나마 fusion protein 정제에 대해서 몇가지 경험을 말씀드릴수있겠네요.. 우선 정제를 하실때에는 4도에서 모든작업을 하도록하고. protease inhibitor 를 소량 넣어서 단백질이 깨지는 것을 막는것이 좋고요. 최대한 빠른 시간에 해야 좋은 결과를 얻는거 같더라고요.. 그리고 빛에 노출시키지 않는게 좋습니다..(산화가 일어나서 서열이 바뀔수 있다고 하더군요..) 정제는 size extraction 이나 RPC를 하면 쉽게 걸러질것이고 그 후에 affinity를 이용한 정제를 하면될겁니다..(이미 하고 있으시다면 pass~) 그리고 단백질은 쉽게 miss foldung이 일어나서 액체상태인데도 원래의 단백질이 아닌경우도 있다고 하더군요.. fusion protein을 자를 때 원래 protein이 영향을 받는 protease가 어떤 것인지 확인한 후에 fusion protein을 자를 enzyme을 선택하시는 것도 중요하다 생각듭니다.. 두서없이 적어서 저도 헷갈리는데 잘이해하실거라 믿습니다..-ㅁ-