2008-02-26
org.kosen.entty.User@1305a4a1
곽지현(kjhspace)
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total protein preparation을 하려고 합니다.
정확히 protein assay를 하려고 하는데 그전에 cell lysis를 통해
preparation하려고 하는것인데
저희 교수님은 예전에 미국계실때 trizol가지고도
protein을 뽑아서 사용하셨다고 하더라구요
한국에서는 그거가지고 실험했다는 곳은 듣지 못해서요
혹시 trizol로 하신 분이 계신지
계시다면 일반 kit를(예를 들면 qiagen 같은곳의) 사서
사용하는것이 훨씬 나을까요?
조언 부탁드립니다.
- cell lysis
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 2
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답변
장윤영님의 답변
2008-02-26- 0
보통 RIPA buffer(SDS, protease inhibitor, phophatase inhibitor포함 )등으로 cell lysis 많이 합니다... 아니면 NP-40등이 포함된 버퍼랄지.. RIPA buffer조성은 인터넷에서 쉽게 찾을 수있구요. 아님 하려고 하는assay관련 논문을 보면 cell lysis buffer 조성은 나와있을 텐데.. cell lysis buffer는 논문마다 천차만별이니 적당한걸로 골라쓰심이... > > total protein preparation을 하려고 합니다. > 정확히 protein assay를 하려고 하는데 그전에 cell lysis를 통해 > preparation하려고 하는것인데 > 저희 교수님은 예전에 미국계실때 trizol가지고도 > protein을 뽑아서 사용하셨다고 하더라구요 > 한국에서는 그거가지고 실험했다는 곳은 듣지 못해서요 > 혹시 trizol로 하신 분이 계신지 > 계시다면 일반 kit를(예를 들면 qiagen 같은곳의) 사서 > 사용하는것이 훨씬 나을까요? > > 조언 부탁드립니다. -
답변
이유진님의 답변
2008-02-26- 0
> > total protein preparation을 하려고 합니다. > 정확히 protein assay를 하려고 하는데 그전에 cell lysis를 통해 > preparation하려고 하는것인데 > 저희 교수님은 예전에 미국계실때 trizol가지고도 > protein을 뽑아서 사용하셨다고 하더라구요 > 한국에서는 그거가지고 실험했다는 곳은 듣지 못해서요 > 혹시 trizol로 하신 분이 계신지 > 계시다면 일반 kit를(예를 들면 qiagen 같은곳의) 사서 > 사용하는것이 훨씬 나을까요? > > 조언 부탁드립니다. Invitrogen에서 나온 Trizol로 RNA와 Protein을 뽑은 경험이 있습니다. RNA isolation하고남은 Trizol층에 isoprophanol을 1.5ml첨가하여 실온 10분방치후 4도 rpm 12000 에 10분 원심분리후 상층액을 제거, 95% 에탄올에 0.3M Guaidine hydrochloride사용해서 pellet을 3회정도 washing, 다시 에탄올 첨가후 voltex후 20분간 실온방치. 4도 7500 rpm에서 5분간 원심분리후 에탄올을 버리고 air dry 5-10분 1% SDS 200ul정도로 팰렛을 녹임 50도 incubation에서 잘녹음(한시간정도걸림) 4도 10000rpm에서 10분 원심분리후 상층액을 따서 Protein실험을 하시면 됩니다.. 간단하지요? ^^ 그러나... 제가 해본 결과.. 단백질 회수량이 적었습니다. 아무래도 RNA를 뽑고 나서인지... 샘플준비에 여유가 있으면 따로 따로 뽑는 것이 효율은 좋았습니다.