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지식나눔

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MTS assay

2008-02-27 org.kosen.entty.User@7a82ba6a 최운선(mysunny80)
  • 3
MTS assay 수행 후 absorbance 값을 photometery로 측정하였습니다. 그런데 absorbance 값이 2 이상이 나올 경우, 그 값의 신뢰가 떨어진다는게 무슨 의미인지 알고 싶습니다. MTS formazan의 spectrum을 보면 490nm에서 2 이상의 absorbance로 MTS assay manual에 나와있기는 합니다만, 팀리더로부터 그러한 값에 대해 지적을 받았습니다. 혹시 경험이 있으시거나, 정확한 이유에 대해 아시는 분 답변 부탁드립니다. 감사합니다.
  • MTS
  • absorbance
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답변 3
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    이상후님의 답변

    2008-02-27
    • 0
    >MTS assay 수행 후 absorbance 값을 photometery로 측정하였습니다. >그런데 absorbance 값이 2 이상이 나올 경우, 그 값의 신뢰가 떨어진다는게 무슨 의미인지 알고 싶습니다. >MTS formazan의 spectrum을 보면 490nm에서 2 이상의 absorbance로 MTS assay manual에 나와있기는 합니다만, >팀리더로부터 그러한 값에 대해 지적을 받았습니다. >혹시 경험이 있으시거나, 정확한 이유에 대해 아시는 분 답변 부탁드립니다. 감사합니다. Spectrometry는 보통 0.4~0.9의 absorbance에서 가장 정확한 값을 가지게 됩니다. 왜냐하면 Spectrometry를 분석할때, instrumental electrical noise에서의 에러와 cell-positioning imprecision 때문에 결과적으로 0.9 이상에서는 실험적인 에러가 생기기 때문입니다. 따라서 0.4~0.9의 absorbance가 얻어지도록 시료의 농도가 조절해야 됩니다. 보통 이런 이론은 분석화학에서 에러관련된 부분에서 많이 다뤄지는 내용입니다. 참고적으로 Rothman et al., Anal. Chem., 1975, 47, 1226.에 보시면 질문자 분께서 궁금해 하시는 내용에 대해서 자세하게 보고되어있습니다.
    답변수정
    >MTS assay 수행 후 absorbance 값을 photometery로 측정하였습니다. >그런데 absorbance 값이 2 이상이 나올 경우, 그 값의 신뢰가 떨어진다는게 무슨 의미인지 알고 싶습니다. >MTS formazan의 spectrum을 보면 490nm에서 2 이상의 absorbance로 MTS assay manual에 나와있기는 합니다만, >팀리더로부터 그러한 값에 대해 지적을 받았습니다. >혹시 경험이 있으시거나, 정확한 이유에 대해 아시는 분 답변 부탁드립니다. 감사합니다. Spectrometry는 보통 0.4~0.9의 absorbance에서 가장 정확한 값을 가지게 됩니다. 왜냐하면 Spectrometry를 분석할때, instrumental electrical noise에서의 에러와 cell-positioning imprecision 때문에 결과적으로 0.9 이상에서는 실험적인 에러가 생기기 때문입니다. 따라서 0.4~0.9의 absorbance가 얻어지도록 시료의 농도가 조절해야 됩니다. 보통 이런 이론은 분석화학에서 에러관련된 부분에서 많이 다뤄지는 내용입니다. 참고적으로 Rothman et al., Anal. Chem., 1975, 47, 1226.에 보시면 질문자 분께서 궁금해 하시는 내용에 대해서 자세하게 보고되어있습니다.
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  • 답변

    정주희님의 답변

    2008-02-27
    • 0
    >MTS assay 수행 후 absorbance 값을 photometery로 측정하였습니다. >그런데 absorbance 값이 2 이상이 나올 경우, 그 값의 신뢰가 떨어진다는게 무슨 의미인지 알고 싶습니다. >MTS formazan의 spectrum을 보면 490nm에서 2 이상의 absorbance로 MTS assay manual에 나와있기는 합니다만, >팀리더로부터 그러한 값에 대해 지적을 받았습니다. >혹시 경험이 있으시거나, 정확한 이유에 대해 아시는 분 답변 부탁드립니다. 감사합니다. MTS assay에서 얻어지는 Abs값을 가지고 세포의 증식 수를 비교할 수 있는 실험이므로, 세포수와 Abs값이 비례해서 나타나는 부분만이 의미가 있다는 말입니다. 간단히 예를 들어 말하자면, 세포 수가 2배로 증가했을때 Abs값이 두배로 증가하는 범위에서만이 그 값을 신뢰할 수 있다고 말할 수 있겠지요.. Abs값을 보면 요즘에는 기계들에 따라 그 측정 범위가 상당히 넓어져서 농도가 진한 경우에도 그 차이를 읽을 수 있는 것이 많아진걸로 알고 있습니다.. 2 이상인 경우도 가끔 나옵니다. 하지만, well안의 세포들이 더이상 자랄수 없는 상태가 되어있는 경우, (Abs값이 2 넘는 경우가 많죠) 처리한 약물에 의한 효과를 확실하게 구별할 수 없게 된다는 것입니다. 그런경우는 처음 well에 seeding하는 세포수를 줄이는 것이 바람직하겠지요.
    답변수정
    >MTS assay 수행 후 absorbance 값을 photometery로 측정하였습니다. >그런데 absorbance 값이 2 이상이 나올 경우, 그 값의 신뢰가 떨어진다는게 무슨 의미인지 알고 싶습니다. >MTS formazan의 spectrum을 보면 490nm에서 2 이상의 absorbance로 MTS assay manual에 나와있기는 합니다만, >팀리더로부터 그러한 값에 대해 지적을 받았습니다. >혹시 경험이 있으시거나, 정확한 이유에 대해 아시는 분 답변 부탁드립니다. 감사합니다. MTS assay에서 얻어지는 Abs값을 가지고 세포의 증식 수를 비교할 수 있는 실험이므로, 세포수와 Abs값이 비례해서 나타나는 부분만이 의미가 있다는 말입니다. 간단히 예를 들어 말하자면, 세포 수가 2배로 증가했을때 Abs값이 두배로 증가하는 범위에서만이 그 값을 신뢰할 수 있다고 말할 수 있겠지요.. Abs값을 보면 요즘에는 기계들에 따라 그 측정 범위가 상당히 넓어져서 농도가 진한 경우에도 그 차이를 읽을 수 있는 것이 많아진걸로 알고 있습니다.. 2 이상인 경우도 가끔 나옵니다. 하지만, well안의 세포들이 더이상 자랄수 없는 상태가 되어있는 경우, (Abs값이 2 넘는 경우가 많죠) 처리한 약물에 의한 효과를 확실하게 구별할 수 없게 된다는 것입니다. 그런경우는 처음 well에 seeding하는 세포수를 줄이는 것이 바람직하겠지요.
    등록된 댓글이 없습니다.
  • 답변

    안길홍님의 답변

    2010-01-27
    • 0

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    >MTS assay 수행 후 absorbance 값을 photometery로 측정하였습니다.>그런데 absorbance 값이 2 이상이 나올 경우, 그 값의 신뢰가 떨어진다는게 무슨 의미인지 알고 싶습니다.>MTS formazan의 spectrum을 보면 490nm에서 2 이상의 absorbance로 MTS assay manual에 나와있기는 합니다만,>팀리더로부터 그러한 값에 대해 지적을 받았습니다.>혹시 경험이 있으시거나, 정확한 이유에 대해 아시는 분 답변 부탁드립니다. 감사합니다. 첨부자료
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    >MTS assay 수행 후 absorbance 값을 photometery로 측정하였습니다.>그런데 absorbance 값이 2 이상이 나올 경우, 그 값의 신뢰가 떨어진다는게 무슨 의미인지 알고 싶습니다.>MTS formazan의 spectrum을 보면 490nm에서 2 이상의 absorbance로 MTS assay manual에 나와있기는 합니다만,>팀리더로부터 그러한 값에 대해 지적을 받았습니다.>혹시 경험이 있으시거나, 정확한 이유에 대해 아시는 분 답변 부탁드립니다. 감사합니다. 첨부자료
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