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mouse spleen에서 lymphocyte만을 분리할려고 해요.도와주세요!!!

안녕하세요. 이번에 처음으로 mouse의 spleen에서 lymphocyte를 분리하는 실험을 하게 되었어요..ㅠ.ㅠ 어떻게 해야하는지 막막한데요...거의 아는 것이 없어서요.. 어떻게 하면 세포에 damage를 줄이면서 RBC만을 제거할 수 있을까요?? 제가 필요한 것은 lymphocyte거든요..lympocyte만을 원해요!!! 어떻게 lymphocyte만을 추출할 수 있을까요?? 혹시 알고 계시는 protocol이 있다면 알려주세요.. 제발요~~~~ㅠ.ㅠ 감솨합니다.
  • spleen
  • lymphocyte
  • RBC
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답변 1
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    김현선님의 답변

    >안녕하세요. 이번에 처음으로 mouse의 spleen에서 lymphocyte를 분리하는 실험을 하게 되었어요..ㅠ.ㅠ >어떻게 해야하는지 막막한데요...거의 아는 것이 없어서요.. >어떻게 하면 세포에 damage를 줄이면서 RBC만을 제거할 수 있을까요?? >제가 필요한 것은 lymphocyte거든요..lympocyte만을 원해요!!! >어떻게 lymphocyte만을 추출할 수 있을까요?? >혹시 알고 계시는 protocol이 있다면 알려주세요.. >제발요~~~~ㅠ.ㅠ >감솨합니다. 시그마에 RBC lysis buffer 가 있습니다. spleen을 homogenize 한후에 media 에서 wash한후 centri합니다. sup 을 버리고 RBC lysis buffer 1ml 정도로 10회 안쪽으로 pipetting 한 후 20초 정도 후 바로 centri 하고 media로 wash 두번이상 하세요. 빨리 안하면 damage 받으니 주의 하시고요
    >안녕하세요. 이번에 처음으로 mouse의 spleen에서 lymphocyte를 분리하는 실험을 하게 되었어요..ㅠ.ㅠ >어떻게 해야하는지 막막한데요...거의 아는 것이 없어서요.. >어떻게 하면 세포에 damage를 줄이면서 RBC만을 제거할 수 있을까요?? >제가 필요한 것은 lymphocyte거든요..lympocyte만을 원해요!!! >어떻게 lymphocyte만을 추출할 수 있을까요?? >혹시 알고 계시는 protocol이 있다면 알려주세요.. >제발요~~~~ㅠ.ㅠ >감솨합니다. 시그마에 RBC lysis buffer 가 있습니다. spleen을 homogenize 한후에 media 에서 wash한후 centri합니다. sup 을 버리고 RBC lysis buffer 1ml 정도로 10회 안쪽으로 pipetting 한 후 20초 정도 후 바로 centri 하고 media로 wash 두번이상 하세요. 빨리 안하면 damage 받으니 주의 하시고요
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