2008-03-16
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윤지혜(dream4242)
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혈소판을 biotinylation 시키는게 제가 biotinylation시킨 혈소판만을 찾기 위한건가요? 제가 공부한바론 그런거 같아요.
그럼 PE와 결합된 streptavidin으로 나중에 염색시키 잖아요, 그래서 측정하는거 맞죠?
저는 biotinylation시킨 혈소판을 활성시켜서 쥐에 주입한후 혈소판 막에 P-selectin이 발현된 양을 알아보려구 하는데요. biotinylation시킨 혈소판중에 P-selectin이 발현된 혈소판은 anti-pelectin으로 해서 flow cytometry로 그양을 알아보거든요. 그럼 biotinylation시킨 혈소판을 측정하고 또다시 P-selectin양을 측정하는 건가요??????
아무리 머리를 싸메어 공부해도 모르겟어요ㅠㅠ
도와주세요
Biotinylated WT platelets were activated in vitro. A) The platelets were infused in WT (−■−) and PSGL-1-/- recipients (−▲−). At the indicated time points, blood was drawn and the infused biotinylated platelets were identified and percentage of P-selectin positive
platelets determined by flow cytometry.
- 혈소판을 biotinylation
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답변 3
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김정모님의 답변
2008-03-17- 0
>혈소판을 biotinylation 시키는게 제가 biotinylation시킨 혈소판만을 찾기 위한건가요? 제가 공부한바론 그런거 같아요. 예 맞습니다. ( 형광표지된 PE-streptavidin(아마도 Ab겠죠?)으로 형광염색시키기 위해서 입니다.) >그럼 PE와 결합된 streptavidin으로 나중에 염색시키 잖아요, 그래서 측정하는거 맞죠? 예 맞습니다. FACS 즉, flow cytometry로 측정합니다. >저는 biotinylation시킨 혈소판을 활성시켜서 쥐에 주입한후 혈소판 막에 P-selectin이 발현된 양을 알아보려구 하는데요. biotinylation시킨 혈소판중에 P-selectin이 발현된 혈소판은 anti-pelectin으로 해서 flow cytometry로 그양을 알아보거든요. 그럼 biotinylation시킨 혈소판을 측정하고 또다시 P-selectin양을 측정하는 건가요?????? 음 조금 혼돈 되시는 거 같습니다. biotinylation 시킨 혈소판은 내가 넣어준 것입니다. 쥐에 있는 혈소판과 구분이 되겠죠. 그리고 그 혈소판을 가지고 Ab로 염색을 하게되면 P-selectin이 발현된 혈소판을 확인할수 있겠습니다. FACS 분석의 경험이 없으신 듯 합니다. 주변에 도움을 구해보세요. > >아무리 머리를 싸메어 공부해도 모르겟어요ㅠㅠ >도와주세요 -
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윤지혜님의 답변
2008-03-17- 0
아ㅜ 공부해도 잘 모르겠어요 그럼 제가 넣어준 혈소판을 찾고자 하면 꼭 biotinylation 시킨 혈소판이 아니구 딴걸로 표지 시킨 혈소판을 넣어서 찾아도 되는건가요?????? 그리고 만약 제가 P-selectin이 발현된 활성 혈소판을 주입한후 시간이 지난뒤 P-selectin 양을 측정하는데 그냥 바로 anti-P-selectin으로 넣어서 검사해도 되는거 아닌가요? 제가 이해가 안되는 것은 biotinylation시킨 혈소판 중에 P-selectin이 발현되어 있는 biotinylation 혈소판이 있고 발현되지 않은 biotinylation 혈소판이 있으면 P-selectin이 발현된 양은 어짜피 anti-P-selectin을 넣어서 찾게 되는거 아닌가요? ㅜㅜㅜ죄송해요 이해가 너무 안되서... -
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김정모님의 답변
2008-03-28- 0
biotinylation 시킨 혈소판을 넣어주는 이유는 넣어준 혈소판 만을 연구타켓으로 잡기 때문입니다. 그 혈소판에서만 p-selectin의 발현을 연구의 대상으로 넣었기 때문이죠. 결국 넣어준 혈소판에서 anti-biotin Ab롤 혈소판을 추적한 후 그 혈소판에서 p-selectin의 발현을 조사하게 되겠죠.