2008-04-05
org.kosen.entty.User@4f6e6464
김중재(jjkaos)
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1. His tag 붙인 단백질을 전기영동하면 안붙인 단백질과 구분이 잘 되나요?
단백질 사이즈는 49kDa 이고, 12.5% SDS-PAGE 했습니다.
붙인 넘과 안 붙인 넘 전기영동 해 보니 사이즈가 잘 구별되지 않더라구요.
His 가 6개나 붙어 있는데...
2. 그리고, homodimer 인 단백질에 his-tag 을 붙였는데,
monomer 하나에만 his-tagging 된 넘하구 (결국 heterodimer 가 된 넘)
monomer 두 개 다 his-tagging 된 넘하구 (그냥 homodimer 인 넘) 분리할 수 있나요?
affinity column 에서 imidazole 농도 조절하면 분리 될 것도 같은데..
그게 그렇게 확실히 구분이 가능한지도 의심이 가네요.
- His-tag
- electrophoresis
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답변 1
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답변
황미경님의 답변
2008-04-07- 0
>1. His tag 붙인 단백질을 전기영동하면 안붙인 단백질과 구분이 잘 되나요? >단백질 사이즈는 49kDa 이고, 12.5% SDS-PAGE 했습니다. > >붙인 넘과 안 붙인 넘 전기영동 해 보니 사이즈가 잘 구별되지 않더라구요. >His 가 6개나 붙어 있는데... > > >2. 그리고, homodimer 인 단백질에 his-tag 을 붙였는데, >monomer 하나에만 his-tagging 된 넘하구 (결국 heterodimer 가 된 넘) >monomer 두 개 다 his-tagging 된 넘하구 (그냥 homodimer 인 넘) 분리할 수 있나요? >affinity column 에서 imidazole 농도 조절하면 분리 될 것도 같은데.. >그게 그렇게 확실히 구분이 가능한지도 의심이 가네요. > > > > his가 6개라 하더라도 12% gel에서는 잘 구분이 가지 않습니다. 15% 이상의 gel에서 그리고 좀 long gel로 길게 running 하시면 구분하실수 있을것 같네요. 이 gel에선 2kDa정도도 구분이 되니까요. 그리고 imidazol이나 salt농도 조절로 fraction 별로 받아 heterodimer 와homodimer를 LC 같은 걸로 확인해야 할겁니다. 이건 확신은 저도 잘 안서네요. 그런데 그렇게 분리할수 있는 condition 잡는게 무지 힘들다는....