2008-04-28
org.kosen.entty.User@402f3dbf
김은경(reiauska)
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안녕하세요..
제가 cell lysis를 하다가 잘못하여서 cell extract의 양이 늘어나게 되었습니다. 그래서 단백질의 농도가 연하게 되어서 sds loading하기가 힘들것같습니다.
그래서 알아보니 단백질을 정제가능하다는 이야기를 들었습니다.
Ammonium Sulfate Precipitation 라는 방법을 쓰면 cell line의 extract(약 100ul)에서도 전체적인 단백질의 농축이 가능한가요?? 제가 western을 할 것이라서요.. 원하는 단백질이 나올려면 최소 70ug이 되어야 하거든요..ㅠ.ㅠ
제발 도와주세요...
- Ammonium Sulfate Precipitation
- 농축
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답변 1
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답변
장성재님의 답변
2008-05-02- 0
최종 목적이 Western blotting으로 목적 단백질을 확인하시는 것 이라면 2-3배 정도 희석된 cell lysate를 이용하셔도 목적 단백질의 밴드를 확인하실 수 있을 것 같습니다만... 암모늄염을 이용한 단백질의 농축도 물론 가능합니다만, 시료의 양이 작기 때문에 한외여과법 (Ultrafitration)을 이용해서 농축하실 수도 있습니다. 목적 단백질의 분자량에 따라 차이가 있을 수 있습니다만, 간단하게 원심분리를 이용하여 일정 분자량 이상의 단백질 시료를 농축하는 Spin tube를 Milipore나 Vivascience 등에서 판매하고 있습니다. 또한, 목적 단백질에 대한 항체를 보유하고 계실 듯 한데 (Western Blotting이 목적 이시라면) Immunoprecipitation을 이용하여 목적 단백질만을 농축하실 수도 있습니다. 단백질이 변성되어도 상관없으시다면 TCA나 Chloroform으로 단백질을 변성시켜 침전을 만든 후 농축한 후 SDS-PAGE sample buffer에 재용해도 가능합니다. >안녕하세요.. >제가 cell lysis를 하다가 잘못하여서 cell extract의 양이 늘어나게 되었습니다. 그래서 단백질의 농도가 연하게 되어서 sds loading하기가 힘들것같습니다. >그래서 알아보니 단백질을 정제가능하다는 이야기를 들었습니다. >Ammonium Sulfate Precipitation 라는 방법을 쓰면 cell line의 extract(약 100ul)에서도 전체적인 단백질의 농축이 가능한가요?? 제가 western을 할 것이라서요.. 원하는 단백질이 나올려면 최소 70ug이 되어야 하거든요..ㅠ.ㅠ >제발 도와주세요...