2008-04-29
org.kosen.entty.User@7506f692
김은경(reiauska)
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cell extract의 농도가 연하여 모두 loading하게 되면 sds page comb에 최대한 넣을수 있는 양을 넘게 되요~~ㅠ.ㅠ
혹시 cell extract를 농축시키는 방법이 있나요? 아님 comb에 최대한 넣을 수 있는 방법을 알고계신가요?? 제발 알려주세요.~~~~
단백질농도가 70ug에서도 연하게 보이는 밴드들이라 더 많은 양의 단백질을 loading하고 싶어요..
도와주세요~~~
- cell extract
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답변 2
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답변
유동곤님의 답변
2008-04-29- 0
>cell extract의 농도가 연하여 모두 loading하게 되면 sds page comb에 최대한 넣을수 있는 양을 넘게 되요~~ㅠ.ㅠ >혹시 cell extract를 농축시키는 방법이 있나요? 아님 comb에 최대한 넣을 수 있는 방법을 알고계신가요?? 제발 알려주세요.~~~~ >단백질농도가 70ug에서도 연하게 보이는 밴드들이라 더 많은 양의 단백질을 loading하고 싶어요.. >도와주세요~~~ 1. 플라스틱 책받침 등을 사용해서 Comb를 자체 제작한다. (comb의 공간을 넓게 만들어서 사용하면 되요.) 2. Protein 농축을 시킨다. a. 밀리포어사에서 판매합니다. b. speedvac 을 사용한다. (오염에 주의해야 하겠죠.) -
답변
서기원님의 답변
2008-04-30- 0
우선.. gel 만들때 spacer를 두꺼운거 사용하세요.. 0.8mm, 1mm 를 보통 쓰는데.. 님께서 사용하는 것보다 두꺼운거.. 사용하세요... 물론 콤도 같은 쎄트로 사용하셔야 하구요.. 사용하시는 키트 브랜드회사에서 판매 합니다.. 10에서 20마넌이면 충분히 살수 있을껍니다.. 물론 연구비가 넉넉치 않으시면 넓은 콤을 자체 제작하시는 수밖에 없구요 둘째론 많은양 로딩하는 팁 있습니다.. well의 안쪽까지 들어가는 길고 얇은모양입니다... 이걸 사용시.. 보통때의 1.5배 정도는 더 넣을수 있어요.. 그리고 앞분이 말씀하신.. centricon 종류는 신중히 사용하세요.. 대부분의 업체에서는 70~80% 수율을 말하지만.. 실제론 실험 해보면 그보담. 떨어지고.. 만약 적은 부피의 샘플이면 더더욱.. 부피가 반이 줄어도 농도는 비슷한 경우도 있습니다.. PEG 나 amonium sulfate. 같은 시약도 고려해 보세요.. 단백질 농축 시약입니다.. 용해도를 떨어뜨려 침전시키는 것으로 적당한 농도에서 침전을 일으키고 원심분리 하면 끝입니다.. 대신 다른 화학물질을 처리하는 것이므로 실험 결과나 샘플에 다른 효과나 영향을 끼칠수 있기때문에 충분히 조사하시고 이용해야 합니다.