2008-05-13
org.kosen.entty.User@1ff7782d
김은진(eva1954)
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제가 돼지 정자에서 Protein을 추출하여 Western을 하고 있습니다.
Normalization을 하고 있는데..B-actin은 전혀 뜨질 않아서..
GAPDH로 조건을 잡고 있는데.. 예비 데이타에서는 밴드가 떴으나 본 실험에서 전혀 뜨지 않아 속만 태우고 있습니다. coomassie blue stain도 해보았는데 protein양 비슷합니다.
sperm에서 western 할 때 GAPDH로 normalization이 잘 되는지요~
잘 안된다면 이유를 설명해주세요~
또 다른 방법으로 normalization할 수 있는 방법이 있다면 알려주세요~
- sperm
- western blotting
- normalization
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답변 1
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답변
장성재님의 답변
2008-05-13- 0
특수한 세포의 경우 종류에 따라서 loading control에는 차이가 있을 수 있습니다. 관련 논문들을 검색해보시면 아시겠지만, sperm을 proteome에서는 normalization에 주로 major cytosolic protein인 beta-tubulin을 사용합니다. sperm의 특성상 수정(fertilization)을 위한 운동을 위해 상당 부분이 flagella로 구성되어 있으므로, beta-actin이나 GAPDH보다는 tubulin을 많이 함유하고 있어 tubulin을 loading control로 사용합니다. >제가 돼지 정자에서 Protein을 추출하여 Western을 하고 있습니다. >Normalization을 하고 있는데..B-actin은 전혀 뜨질 않아서.. >GAPDH로 조건을 잡고 있는데.. 예비 데이타에서는 밴드가 떴으나 본 실험에서 전혀 뜨지 않아 속만 태우고 있습니다. coomassie blue stain도 해보았는데 protein양 비슷합니다. > > sperm에서 western 할 때 GAPDH로 normalization이 잘 되는지요~ >잘 안된다면 이유를 설명해주세요~ >또 다른 방법으로 normalization할 수 있는 방법이 있다면 알려주세요~ > >