2008-06-01
org.kosen.entty.User@33c35646
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요즘 계속 DNA를 뽑아 제한효소 처리를 하는데요...
실험이 계속 실패하구있습니다...
원인을 찾으려해도.. 아는 지식이 부족하고.. 자료도 많지 않아서
이렇게 글을 올립니다..
DNA는 50ng/ul 를 2ul 넣었구..
BSA가 포함된 buffer 2ul
Enzyme(BamHI)은 4000unit, 10u/ul 를 1/10 로 희석해서 0.5ul
넣었습니다. total volume은 20ul로 했구요...
반은시간은 37도에서 5시간 정도 반응했습니다...
전기영동 결과를 확인하니..
역시나 잘린 패턴은 확인이안돼고...가장 큰 사이즈의 DNA만 결과로
나왔습니다.
지난번실험에도 제대로 안돼서 DNA를 다시 뽑아서 실험했구요...
보통 실험하실때 DNA의 농도와 양 그리고 효소농도와 양을 어떻게 하시는지도
궁금합니다...
- Enzyme
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답변 1
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답변
여인철님의 답변
2008-06-02- 0
> 요즘 계속 DNA를 뽑아 제한효소 처리를 하는데요... > > 실험이 계속 실패하구있습니다... > > 원인을 찾으려해도.. 아는 지식이 부족하고.. 자료도 많지 않아서 > > 이렇게 글을 올립니다.. > > DNA는 50ng/ul 를 2ul 넣었구.. > > BSA가 포함된 buffer 2ul > > Enzyme(BamHI)은 4000unit, 10u/ul 를 1/10 로 희석해서 0.5ul > > 넣었습니다. total volume은 20ul로 했구요... > > 반은시간은 37도에서 5시간 정도 반응했습니다... > > 전기영동 결과를 확인하니.. > > 역시나 잘린 패턴은 확인이안돼고...가장 큰 사이즈의 DNA만 결과로 > > 나왔습니다. > > 지난번실험에도 제대로 안돼서 DNA를 다시 뽑아서 실험했구요... > > 보통 실험하실때 DNA의 농도와 양 그리고 효소농도와 양을 어떻게 하시는지도 > > 궁금합니다... > > BamHI enzyme 을 1ul로 늘리시고....또는 희석하지 않은 효소를 1ul넣어보세요. 그리고 DNA 양도 4, 6, 8 이런 식으로 늘려보시고.... 이건 안나오는 경우가 거의 없습니다. 보니까 DNA 농도도 충분하고.. 효소 양을 늘려도 안나온다면 일단 insert...잘려질 DNA 크기를 알아야 겠죠..DNA가 매우 작아서 밑으로 빠져 나간경우가 있겠고.. enzyme digestion에 사용할 DNA가 제대로 준비된 것인지도 확인해야 겠죠. 다시 prep.을 해보는 것도 한방법이겠죠.. 또한 enzyme에 문제가 있을 수도 있으니까 같은 효소를 쓰되 다른 곳에 보관되어 있는것을 비교해서 써보세요. 조금 빌려서 써보는 것도 좋은 방법이죠. 반응시간도 overnight 시켜보세요~