2008-06-10
org.kosen.entty.User@69673efd
박선영(pgene)
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안녕하세요.
제가 처음으로 suspension culture를 시작하게 되었어요.
그런데 어떻게 해야할지 전혀 감이 안와서요.
혹시 아시는 분 계시다면
hive-five(insect cell) cell을 spinner flask를 이용하여
suspension culture 하는 방법을 좀 자세하게 알려주세요.
배지부터 방법까지요...
부탁드립니다.
급해요!
감사합니다.
- cell
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 1
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답변
장성재님의 답변
2008-06-11- 0
예전에도 비슷한 질문을 남기셨던 것 같은데요. 과거 질문 내용을 검색해 보시길... High Five cells은 원래 비부착성 세포이므로, suspension culture가 가능합니다. 일반적인 부착성 동물세포와는 달리 monolayer culture (정치배양)를 할 경우에도 플라스크의 표면에 넓게 퍼져서 자라지는 않습니다. 피펫팅만으로 쉽게 분리됩니다. 따라서, Spinnner flask나 shaker를 이용해서 suspension culture가 쉽게 됩니다. 재조합 단백질을 생산하시는 목적으로 사용하신다면, 무혈청배지를 추천드립니다. 다양한 종류의 배지가 시판되어 있으니 그 중에서 선택하시길 바랍니다. 배지에 따라서 차이가 있습니다만 무혈청배지 (suspension culture용)의 경우 세포에 대한 damage를 최소화하기 위해서 대개 새로운 배지로의 adaptation 과정을 거치게 됩니다. 초기 세포 농도는 일반적으로 1-5 X 10^5 cells/mL로 시작해서 3일 가량 배양한 후 (대개 1 - 4 X 10^6 cells/mL 정도까지 배양 후) passage하는 과정을 거칩니다. 장기간 passage가 길어질수록 cell들간에 clotting (aggregation)이 발생하여 재조합 단백질의 생산수율이 급격히 떨어질 수 있으니 Working cell stcok을 따로 만들어 주신 후 최소 3개월마다 새로운 stock을 이용해서 배양하는 것이 좋습니다. 위의 내용을 포함한 좀더 자세한 사항이 일반적으로 상품화된 배지의 매뉴얼에 기재된 경우가 대부분이므로 참고하시길 바랍니다. 예전에 업로드해 드린 매뉴얼을 다시 첨부합니다. 일반적인 hybridoma의 배양법과 매우 유사하므로 참고하실 수 있을 겁니다. >안녕하세요. >제가 처음으로 suspension culture를 시작하게 되었어요. >그런데 어떻게 해야할지 전혀 감이 안와서요. >혹시 아시는 분 계시다면 >hive-five(insect cell) cell을 spinner flask를 이용하여 >suspension culture 하는 방법을 좀 자세하게 알려주세요. >배지부터 방법까지요... >부탁드립니다. >급해요! >감사합니다.