2008-06-30
org.kosen.entty.User@76eb2ff6
전상옥(lyoovue2nd)
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질문 1)
약물이 로딩된 liposome의 TEM image를 얻고자 하는데 liposome과 같은 액상제형의 경우 시료제작방법이 다를 것이라 생각되는데요
liposome 관련 논문에서 보면 liposome suspension 희석액을 grid에 떨어뜨린 다음 staining하여 TEM으로 관찰한다는 정도로 간략하게 소개하고 있습니다 liposome의 TEM image를 얻기위한 시료제작방법을 자세하게 알고 싶습니다.
질문 2)
또 한가지 질문 사항은 세포가 아닌 피부조직을 CLSM을 이용하여 관찰하고자 하는데 CLSM관찰에 앞서 시료전처리 방법이 궁금합니다. CLSM의 경우 주로 조직면역형광염색법을 이용하여 세포의 특정 단백질 등의 발현을 관찰하는데 제가 보고자 하는 것은 세포가 아닌 피부조직이기 때문에 전처리 방법을 세포관찰하는 것처럼 해야하는 것인지 궁금합니다. CLSM관찰을 위한 시료 전처리 과정(parrafin 고정, 염색..등)을 자세하게 알고 싶습니다.
- TEM
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 1
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답변
박성철님의 답변
2008-07-03- 0
>질문 1) > >약물이 로딩된 liposome의 TEM image를 얻고자 하는데 liposome과 같은 액상제형의 경우 시료제작방법이 다를 것이라 생각되는데요 >liposome 관련 논문에서 보면 liposome suspension 희석액을 grid에 떨어뜨린 다음 staining하여 TEM으로 관찰한다는 정도로 간략하게 소개하고 있습니다 liposome의 TEM image를 얻기위한 시료제작방법을 자세하게 알고 싶습니다. > 답변1) 재료: carbon coated cupper grid (300-400 mesh), plasma cleaner, uranyl acetate (stain시약), porcep, sample 준비: 1. liposome의 준비 (SUV, LUV, GUV) 2. 준비된 grid(TEM의 beam에 의한 코팅지지체의 변화를 막기위해 carbon coated cupper grid를 많이 사용)를 plasma cleaner에 넣고 1분간 표면을 hydrophobic에서 hydrophilic으로 만든뒤 시료를 5 ul를 올리고 2-3 분간 둔다. 3. 2-3분뒤 filter paper를 잘라서 grid의 옆에 살짝 대어서 물기를 흡수한뒤 parafilm에 준비된 3차증류수 방울에 2-3번 washing 한다. 그리고 0.5-2% UAC staining 시약으로 grid 위에 5 ul올린다. 1분후에 다시 filter paper로 물기를 제거하고 공기중에 5-10 정도 말리고 TEM 관찰 PS) plasma cleaner가 좀 바싸므로 단순히 관찰만 하실려면 고농도의 liposome을 올리면 개중에 붙는 얘들도 있겠죠. 그러나 거의 liposome 이 파괴된 얘들만 보입니다. 자세하게 알고 싶어시면 쪽지 남기세요.. >질문 2) > >또 한가지 질문 사항은 세포가 아닌 피부조직을 CLSM을 이용하여 관찰하고자 하는데 CLSM관찰에 앞서 시료전처리 방법이 궁금합니다. CLSM의 경우 주로 조직면역형광염색법을 이용하여 세포의 특정 단백질 등의 발현을 관찰하는데 제가 보고자 하는 것은 세포가 아닌 피부조직이기 때문에 전처리 방법을 세포관찰하는 것처럼 해야하는 것인지 궁금합니다. CLSM관찰을 위한 시료 전처리 과정(parrafin 고정, 염색..등)을 자세하게 알고 싶습니다.