2008-06-30
org.kosen.entty.User@664108a5
김희경(adem)
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I wonder how to increas the solubility of insoluble 6XHIS tagged protein using E.Coli sysetem.
I am ignorent of protein expression and purification so that I would like to take advices fromm people who are specilized in expression of recombinent proteins.
A protein I am studing is insouble on the condition of 1mM IPTG, induction time (6,12,24 ), 15 degree, BL21 host.
what is the condition that can affect the solubility of protein?
plz let me know what factors can be changed.
- protein solubility
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답변 1
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답변
장성재님의 답변
2008-07-02- 0
E.coli를 이용한 재조합 단백질의 aggregation을 줄이는 방법 (solubiity를 향상시키는 방법)을 말씀하시는 것 같군요. 가장 일반적으로 많이 사용하는 교과서에 기재된 방법으로는 세포를 파쇄한 후 간편히 inclusion body를 분리한 후 denaturation 처리를 통하여 soluble 상태로 만든 후 단계적으로 buffer를 교환하며 dialysis를 수행함으로써 soluble 단백질을 얻는 (refolding 과정을 거치는) 방법이 있습니다 (실험서 참조). 또한, 저온배양 등의 배양 조건을 조절하는 방법도 논문을 통해 발표된 적도 있습니다. 상용화된 경우로는 Solubility Enhancement Tags 등을 붙이는 방법, inclusion body로 생산한 후 계면활성제를 이용하여 refolding시키는 방법, PDI (protein disulfide isomerase)를 이용하는 방법 등 다양한 방법이 키트화되어 있습니다. 자신의 실험에 적당한 방법을 찾으시길... > I wonder how to increas the solubility of insoluble 6XHIS tagged protein using E.Coli sysetem. > > I am ignorent of protein expression and purification so that I would like to take advices fromm people who are specilized in expression of recombinent proteins. > A protein I am studing is insouble on the condition of 1mM IPTG, induction time (6,12,24 ), 15 degree, BL21 host. > what is the condition that can affect the solubility of protein? > plz let me know what factors can be changed. >