2008-07-02
org.kosen.entty.User@46a9ec5f
이인태(biolit)
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안녕하세요.
제가 plant cell을 배양해서 단백질을 정제했습니다.
동결건조까지 완료했습니다.
최종 완료 샘플의 잔류 DNA 양을 분석하라네요.
그런데, 어떻게 해야하는지 모르？毛楮？
manual 로 가능한 벙법을 알려주세요!!^^
즐거운 하루되세요.
- DNA
- Protein
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 3
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답변
이상후님의 답변
2008-07-02- 0
>안녕하세요. >제가 plant cell을 배양해서 단백질을 정제했습니다. >동결건조까지 완료했습니다. >최종 완료 샘플의 잔류 DNA 양을 분석하라네요. >그런데, 어떻게 해야하는지 모르？毛楮？ >manual 로 가능한 벙법을 알려주세요!!^^ > >즐거운 하루되세요. Pico Green, SYBO green, 두가지 시약을 이용하거나, ECl method을 통해서 쉽게 측정이 가능합니다. 랩 매뉴얼의 guideline에 따라서 측정을 해 보시길 바랍니다. -
답변
장성재님의 답변
2008-07-03- 0
나름대로 생물학적 제제의 규정 및 시험법을 조사해 봤습니다만...세밀한 내용이 담긴 자료는 구하기가 어렵군요. 아직 정확한 시험법이 확정되지 않은 것 같습니다. 보통 허가를 신청한 쪽에서 제출한 자료를 토대로 검토하기 때문인 것 같습니다. 외국의 경우 isotope로 표식한 소량의 DNA 시료를 small scale의 생물학적 제제의 초기 정제 공정에 첨가한 후 최종 정제 산물의 방사선량을 측정하는 “spiking“ 이란 방법이 과거 주로 사용되었으며, 최근에는 직접적으로 잔류 DNA의 양을 측정하는 방법으로써 Threshold(TM) 법이란 ss-DNA에 대한 항체를 이용한 효소적 측정 방법을 주로 사용하는 것 같습니다. 물론 감도면에서 우수한 ECL을 이용한 hybridization법 (sourthern hybridization)도 사용이 가능합니다. 또한, 간접적인 방법입니다만 보다 감도가 높은 방법으로 PCR로 DNA를 증폭시킨 후에 위의 분께서 언급하신 이중 나선 DNA에 결합하는 dye를 이용하여 정량하는 방법도 종종 사용되고 있습니다. 기업체에 근무하시는 분이시라면 SOP 및 validation 타당성, 그리고 비용면을 고려하셔서 가장 적합한 시험법을 선택하시는 편이 좋을 듯 싶습니다. 일단 간단하게 동결건조 시료를 spectrophotometer와 agarose gel electrophoresis로 확인해보시는 것이 어떨까요. 식약청의 생물학적 제제 기준 및 시험법 자료를 첨부합니다. >안녕하세요. >제가 plant cell을 배양해서 단백질을 정제했습니다. >동결건조까지 완료했습니다. >최종 완료 샘플의 잔류 DNA 양을 분석하라네요. >그런데, 어떻게 해야하는지 모르？毛楮？ >manual 로 가능한 벙법을 알려주세요!!^^ > >즐거운 하루되세요. -
답변
안길홍님의 답변
2010-01-28- 0
첨부파일
>안녕하세요.>제가 plant cell을 배양해서 단백질을 정제했습니다.>동결건조까지 완료했습니다.>최종 완료 샘플의 잔류 DNA 양을 분석하라네요.>그런데, 어떻게 해야하는지 모르？毛楮？>manual 로 가능한 벙법을 알려주세요!!^^>>즐거운 하루되세요. 첨부자료