2008-07-10
org.kosen.entty.User@29604191
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이번에 azocasein을 이용하여 protease활성을 측정하는데요...
제가 궁금한것은..배지를 어떤것을 사용하는지에 따라...활성이 나타나는
지 안나타나는지 궁금하네요...있다면, 어떤영향을 미치는지 알고싶습니다.
- protease
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답변 1
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답변
박재영님의 답변
2008-07-10- 0
영향이 없다고 볼수는 없을것 같습니다. 일단 어떤 셀라인을 쓰신건지 모르겠네요.. 그게 네이티브하게 원래 그 프로테이즈를 생산하는 세포에서 정제하신것인지 아니면 재조합체를 만들어서 발현후에 정제하신것인지 모르겠군요.. 만약 네이티브하게 그 단백질분해효소를 생산하는 세포라면 원래 자연에서 그 세포가 살던 환경과 다를 경우에는 효소작용이 저하될수 있죠. 예를 들어 해양에서 생활하는 균주인데 Nacl 농도가 너무 낮은 배지라면 효소가 활성이 저하될 수 있을 겁니다. 그리고 만약 그게 재조합체라면 좀 틀려지는데 호스트로 아마도 대장균일텐데 그때는 이데 좀 복잡해서 단순히 배지 문제라기 보다는 대장균에서 그 단백질 분해효소를 발현하는데 관여하는 수많은 요소들중에 어떤게 잘못되서 액티비티가 안나오는지 판단하기란 사실상 불가능 하다고 봅니다. 그때는 벡터를 바꿔서 클로닝을 다시하는 편이 좋을듯.. 아니면 효소 자체의 활성화되는 환경에 따라 달라질수도 있는데 salt 농도나 온도, 효소 자체의 농도나 기질의 농도 등..다양한 변수를 바꾸어 실험을 다시 해보시는 편이 좋을듯 합니다. 그리고 한가지 더 추가하자면 Azocasein이 절대적인 단백질 분해효소의 기질이 아니라는 사실도 명심하셔야 합니다. 일부 단백질 분해효소들의 경우 아조케이신이 기질로 작용안하는 경우도 있습니다. 그때는 기질을 바꾸어 보세요. 세린, 시스테인, 메탈로 프로테이즈등등에 대해 루틴하게 유용되는 시판하는 기질을 이용해 보시는편도 좋을듯 합니다. (이때부턴 돈 문제죠..ㅋ)