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지식나눔

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3T3-L1에 대해서~~

2008-07-22 org.kosen.entty.User@18eba72c 김현아(hyunah85)
  • 2
지금 3T3-L1을 다루고있는데 6well에서 cell이 100%가 되거나 분화를 시키려고 보면 cell이 자꾸 뜨네요~ 실험시 배지를 갈거나 cell를 다룰때, 옮기때 등 조심스럽게 다루었습니다. cell스탁도 새로 주문했구요. 배지는 DMEM(Hyclone)를 사용하며, 전 분화시 10ml 배지에 IBMX 0.1ml, Dexamethasone 0.01ml, Insulin 0.01ml 를 썩어서 분화시킵니다. cell이 뜨는 이유가 무엇일까요?? 답변부탁드려요~
  • 3T3-L1
  • adipose
  • differentiation
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답변 2
  • 답변

    김정민님의 답변

    2008-07-23
    • 0
    3T3-L1 preadipocyte was cultured in DMEM with 10% fetal bovine serum (FBS) at 37？ in 5% CO2. To induce differentiation, postconfluent 3T3-L1 preadipocytes were stimulated for 3 days with 0.5 mM 3-isobutyl-1-methylxanthine, 1 ？ dexamethasone, and 200 nM insulin added to DMEM/10% FBS culture medium. On day 3, the medium was replaced for 2-day with culture medium containing 200 nM insulin. On day 5, the medium was replaced with culture medium, which was changed every 2 days thereafter until the cultures were analyzed on days 7-10, and cell differentiation was monitored by phase-contrast microscopy.
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    3T3-L1 preadipocyte was cultured in DMEM with 10% fetal bovine serum (FBS) at 37？ in 5% CO2. To induce differentiation, postconfluent 3T3-L1 preadipocytes were stimulated for 3 days with 0.5 mM 3-isobutyl-1-methylxanthine, 1 ？ dexamethasone, and 200 nM insulin added to DMEM/10% FBS culture medium. On day 3, the medium was replaced for 2-day with culture medium containing 200 nM insulin. On day 5, the medium was replaced with culture medium, which was changed every 2 days thereafter until the cultures were analyzed on days 7-10, and cell differentiation was monitored by phase-contrast microscopy.
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  • 답변

    전승우님의 답변

    2008-08-18
    • 0
    media를 분주하실때 pipet aid를 이용하시죠? 저도 그걸 이용하는데, 숙달되기 전까진 media 교환할때 Cell이 많이 뜨더라구요~ 분주시 조심스럽게 다루셨더라고 아주아주 천천히 well의 벽으로 흘려서 교환해보세요 아주아주 천천히요~ 1ml들어가는데 3~5초 걸린다고 생각하고.. 그전에 suction 시에도 well을 기우려서 천천히 suction 하시구요. 제가 봤을땐 cell도 새로주문하셨는데 그런 현상이 있는건 배지 교환시에 cell damage로 뜨는게 아닌가 싶네요. 그리고 위에분 말씀대로 3T3-L1 분화시에는 FBS (fetal bovine serum)을 사용해야 분화되는데 질문하신 내용은 MDI(IBMX, Dexa, Insulin)만으로 배지교환하시는 중 일어난 현상같으니 pipeting에 더 신경을 써보심이 어떨지요^^
    답변수정
    media를 분주하실때 pipet aid를 이용하시죠? 저도 그걸 이용하는데, 숙달되기 전까진 media 교환할때 Cell이 많이 뜨더라구요~ 분주시 조심스럽게 다루셨더라고 아주아주 천천히 well의 벽으로 흘려서 교환해보세요 아주아주 천천히요~ 1ml들어가는데 3~5초 걸린다고 생각하고.. 그전에 suction 시에도 well을 기우려서 천천히 suction 하시구요. 제가 봤을땐 cell도 새로주문하셨는데 그런 현상이 있는건 배지 교환시에 cell damage로 뜨는게 아닌가 싶네요. 그리고 위에분 말씀대로 3T3-L1 분화시에는 FBS (fetal bovine serum)을 사용해야 분화되는데 질문하신 내용은 MDI(IBMX, Dexa, Insulin)만으로 배지교환하시는 중 일어난 현상같으니 pipeting에 더 신경을 써보심이 어떨지요^^
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