2008-07-27
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정인식(kaiserr)
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안녕하세요. 크로마토그램에 대해 열심히 배우고 있는 대학원생입니다. 다름이 아니라 천연물에서 추출한 수용성 물질을 제조용 HPLC를 통해 분리하던 중 발생한 문제에 대해 해결 방안을 \찾지 못해서 질문을 드립니다. 이 물질은 대단히 수용성 물질로서 용출되는 retention time이 매우 빠르고 비슷한 시간대에 여러 물질이 섞여있습니다. 이동상을 water 100%로 사용하고, recycling 기능을 이용하여 순수한 정제를 시도해 봤지만 거의 비슷한 retention time의 두 물질이 분리가 되지 않는데요, 이 물질들을 효과적으로 분리할 수 있는 수단이 있을까요? 이동상이 가장 극성이 강한 물이니까 유기용매를 섞는 방법은 안될 것이고, 버퍼의 조절이라던지 특수 시약 등을 넣어 이동상의 극성도를 높일 수 있는 방법이 없는지 궁금합니다. 또한 시료 전처리 방법에 있어서도 유효한 처리 방법이 있다면 가르침을 받고 싶습니다. 고수님들의 고견 부탁드립니다.
- water
- retention time
- mobile phase
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 3
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답변
윤영민님의 답변
2008-07-28- 0
매질의 극성을 높이는 거라면, 순수한 물을 사용하기 보다는 산을 첨가하는게 어떨까 싶습니다. 물론 처음부터 강산을 쓰는 것 보다는 약산 내지 해당하는 산염기 버퍼용액을 같이 사용하는 편이 좋구요, 특히 천연물에서 추출한 수용성물질이라시니까 반응성이 없는 것을 잘 골라야겠지요. 예전에 암모늄계열의 약산(및 버퍼용액)을 썼던 것 같은데, 기억이 좀 가물가물하네요. 그리고, 서로 다른 수용성 물질의 분리나 회수가 주요 목적이라면, 다른 혼합물분리방법을 사용하시든지, 아니면 그 후에 HPLC를 사용하는 것이 맞을 것 같습니다. 그 물질들이 수소결합을 하고 있다면, 위의 약산버퍼용액에 잘 혼합시킨 후 시간이 어느 정도 지난 다음에 분리하시는 편이 좋겠습니다. >안녕하세요. 크로마토그램에 대해 열심히 배우고 있는 대학원생입니다. 다름이 아니라 천연물에서 추출한 수용성 물질을 제조용 HPLC를 통해 분리하던 중 발생한 문제에 대해 해결 방안을 \찾지 못해서 질문을 드립니다. 이 물질은 대단히 수용성 물질로서 용출되는 retention time이 매우 빠르고 비슷한 시간대에 여러 물질이 섞여있습니다. 이동상을 water 100%로 사용하고, recycling 기능을 이용하여 순수한 정제를 시도해 봤지만 거의 비슷한 retention time의 두 물질이 분리가 되지 않는데요, 이 물질들을 효과적으로 분리할 수 있는 수단이 있을까요? 이동상이 가장 극성이 강한 물이니까 유기용매를 섞는 방법은 안될 것이고, 버퍼의 조절이라던지 특수 시약 등을 넣어 이동상의 극성도를 높일 수 있는 방법이 없는지 궁금합니다. 또한 시료 전처리 방법에 있어서도 유효한 처리 방법이 있다면 가르침을 받고 싶습니다. 고수님들의 고견 부탁드립니다. -
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이상후님의 답변
2009-01-16- 0
>안녕하세요. 크로마토그램에 대해 열심히 배우고 있는 대학원생입니다. 다름이 아니라 천연물에서 추출한 수용성 물질을 제조용 HPLC를 통해 분리하던 중 발생한 문제에 대해 해결 방안을 \찾지 못해서 질문을 드립니다. 이 물질은 대단히 수용성 물질로서 용출되는 retention time이 매우 빠르고 비슷한 시간대에 여러 물질이 섞여있습니다. 이동상을 water 100%로 사용하고, recycling 기능을 이용하여 순수한 정제를 시도해 봤지만 거의 비슷한 retention time의 두 물질이 분리가 되지 않는데요, 이 물질들을 효과적으로 분리할 수 있는 수단이 있을까요? 이동상이 가장 극성이 강한 물이니까 유기용매를 섞는 방법은 안될 것이고, 버퍼의 조절이라던지 특수 시약 등을 넣어 이동상의 극성도를 높일 수 있는 방법이 없는지 궁금합니다. 또한 시료 전처리 방법에 있어서도 유효한 처리 방법이 있다면 가르침을 받고 싶습니다. 고수님들의 고견 부탁드립니다. formic acid를 이동상에 첨가해서 사용해 보시기 바랍니다. 약 1%정도까지 variation 주면서 피크의 분리 정도를 체크해 보세요. -
답변
안길홍님의 답변
2010-02-04- 0
>안녕하세요. 크로마토그램에 대해 열심히 배우고 있는 대학원생입니다. 다름이 아니라 천연물에서 추출한 수용성 물질을 제조용 HPLC를 통해 분리하던 중 발생한 문제에 대해 해결 방안을 \찾지 못해서 질문을 드립니다. 이 물질은 대단히 수용성 물질로서 용출되는 retention time이 매우 빠르고 비슷한 시간대에 여러 물질이 섞여있습니다. 이동상을 water 100%로 사용하고, recycling 기능을 이용하여 순수한 정제를 시도해 봤지만 거의 비슷한 retention time의 두 물질이 분리가 되지 않는데요, 이 물질들을 효과적으로 분리할 수 있는 수단이 있을까요? 이동상이 가장 극성이 강한 물이니까 유기용매를 섞는 방법은 안될 것이고, 버퍼의 조절이라던지 특수 시약 등을 넣어 이동상의 극성도를 높일 수 있는 방법이 없는지 궁금합니다. 또한 시료 전처리 방법에 있어서도 유효한 처리 방법이 있다면 가르침을 받고 싶습니다. 고수님들의 고견 부탁드립니다. 첨부자료