2008-07-30
org.kosen.entty.User@f7ac2c3
장복환(beatifulno)
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Mouse (balb/c)의 liver를 이용하여 FACS staining을 하려고 합니다.
여러 논문에서 Collagenase type 4 를 이용하던데, 이를 이용한
Liver의 Primary culture protocol 알려주십시요.
또한 perfusion method 와 단순한 enzymetic digesion의 차이점에 대해서
알려주시면 정말 감사하겠습니다.
지난 실험에서 Collagenase 와 DNase, FBS, BSA로 Enzyme solution 을 만들어
culture를 시도해봤지만 생존률이 극히 낮게 나와버려서 말입니다.
perfusion method에 뭔가 차이점이 있다면 perfusion method 를 따를 생각입니다.
꼭 부탁드리겠습니다.
p.s) 관련 논문 보내주시면 복받으실 겁니다!
- primary culture
- liver
- facs
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답변 1
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답변
홍동호님의 답변
2009-01-28- 0
>Mouse (balb/c)의 liver를 이용하여 FACS staining을 하려고 합니다.>>여러 논문에서 Collagenase type 4 를 이용하던데, 이를 이용한>>Liver의 Primary culture protocol 알려주십시요.>>또한 perfusion method 와 단순한 enzymetic digesion의 차이점에 대해서>>알려주시면 정말 감사하겠습니다.>>지난 실험에서 Collagenase 와 DNase, FBS, BSA로 Enzyme solution 을 만들어>>culture를 시도해봤지만 생존률이 극히 낮게 나와버려서 말입니다.>>perfusion method에 뭔가 차이점이 있다면 perfusion method 를 따를 생각입니다.>>꼭 부탁드리겠습니다.>>p.s) 관련 논문 보내주시면 복받으실 겁니다! 제가 가지고 있는 protocol은 없지만 perfusion method 와 단순한 enzymetic digesion의 차이점은 앞의 방법은 혈관으로 효소를 통과시켜 간의 내부에 있는 콜라겐을 용해 시켜 간 전체에서 간세포를 얻는 방법으로 많은 양의 세포를 얻으면서 손상을 받지 않는 방법이고 뒤의 단순한 효소적인 방법은 수율도 적고 세포 손상도 많이 받는 방법입니다. 그리고, 저는 마우스 보다는 덩치가 있는 랫드를 사용하여 퍼퓨전 방법을 사용하여 간세포를 얻었습니다. 200-300 g 정도되는 랫드를 마취제로 마취하여 퍼퓨전 틀에 묶은 뒤에 포탈베인에 23G 카테타를 넣고 실로 묶고, 페리스탈틱 펌프로 배양액(HBBS)을 흘리면서 (똑똑똑 흘리는 정도)페동맥에 18G 카테타를 넣어 묶은 후에 계속 배양액을 흘려 준다. 콜라겐나제를 100 mg 정도를 10 ml에 녹인 것을 배양액에 넣은 후 배양액이 흐르는 시간을 15분 정도를 한다음 시험을 종료하고 간 엽을 조심스럽게 잘라내서 100 ml 디쉬에 넣은 후 가위로 찹핑하면 간세포가 얻어진다. 일반적인 퍼퓨전 방법을 하는 기본 세팅을 전제로 설명을 드린것입니다.