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지식나눔

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westernblot에서 skim milk로 blocking하는 이유

2008-08-16 org.kosen.entty.User@2b00012c 이성학(lshak01)
  • 1
Westernblot시 skim milk를 이용하여 blocking 하는데, 이과정이 필요한 이유와 어떠한 원리에 의해 이루어지는지 알고 싶습니다.
  • westernblot
  • skim mlik
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답변 1
  • 답변

    한재석님의 답변

    2008-08-17
    • 0
    Western blot에서 gel running으로 분리된 단백들은 membrane으로 transfer시킨다는 것은 알고 계실 것입니다. membrane은 보통 PVDF 또는 Nitrocellulose membrane을 쓰며 이들 membrane에는 protein들이 굉장히 잘 달라붙습니다. 이 성질을 이용하여 gel에서 분리한 protein들을 membrane에 transfer하는 거죠. 하지만 transfer가 끝난 후에 당연히 protein들이 붙지 않는 곳이 존재하며, 이들 부위에 다음 단계에 쓰이는 antibody가 nonspecific하게 binding할 수 있습니다. 이렇게 되면 나중에 background가 엄청나게 뜨게 되는 겁니다. 그러므로 이들 membrane부위에 antibody가 붙지 않도록 다른 protein들을 binding시켜야 하며, 이 목적으로 blocking buffer를 쓰는 겁니다. blocking buffer에는 nonfat skim milk, 또는 BSA (Bovine serum albumin)등을 보통 쓰고 있습니다.
    답변수정
    Western blot에서 gel running으로 분리된 단백들은 membrane으로 transfer시킨다는 것은 알고 계실 것입니다. membrane은 보통 PVDF 또는 Nitrocellulose membrane을 쓰며 이들 membrane에는 protein들이 굉장히 잘 달라붙습니다. 이 성질을 이용하여 gel에서 분리한 protein들을 membrane에 transfer하는 거죠. 하지만 transfer가 끝난 후에 당연히 protein들이 붙지 않는 곳이 존재하며, 이들 부위에 다음 단계에 쓰이는 antibody가 nonspecific하게 binding할 수 있습니다. 이렇게 되면 나중에 background가 엄청나게 뜨게 되는 겁니다. 그러므로 이들 membrane부위에 antibody가 붙지 않도록 다른 protein들을 binding시켜야 하며, 이 목적으로 blocking buffer를 쓰는 겁니다. blocking buffer에는 nonfat skim milk, 또는 BSA (Bovine serum albumin)등을 보통 쓰고 있습니다.
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