2008-08-19
org.kosen.entty.User@97fecc5
신재동(poty777)
- 5
안녕하세요..
동결건조를 했습니다... 세벽을 보호하기 위해 20% glycerol를 넣은 후 , -70도씨 냉장고에
보관한후 동결건조 하였습니다. 그러나 다 날라가지 않고 건조되지도 않았습니다.
혹시 동결건조 할때 glycerol를 첨가하지 않나요?
쉬운 질문인것 같지만 저한테 너무 어렵습니다.
도와주세요..
감사합니다,
- 동결건조
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 5
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답변
류성열님의 답변
2008-08-20- 0
균주를 동결보존할 경우 글라이세롤같은 것을 넣습니다. 즉 균주가 동결시 세포손상없이 안전하게 휴면할 수 있도록 도와주는 것이 동결보호제로서 글라이세롤 같은 것이 있습니다. 그리고 동결건조는 균사체를 가지고 계시는 저온냉동고에 넣어(얼림) 동결건조기에서 건조를 하시면 될 것 같습니다. 특별히 동결건조시에는 첨가하는 것이 없습니다. 다만 동결시 균주를 배양하던 배지를 멸균수로 세척하여 얼리는 것이 좋습니다. -
답변
신재동님의 답변
2008-08-20- 0
안녕하세요.. 답변해 주셔서 감사합니다.. 저가 하는 실험을 간단히 말씀을 드리며, 균(yeast)을 키워 동결건조 후에 sonication방법으로 protein을 얻는 것입니다.. 동결건조된 균을 얻을려고 해서 glycerol를 넣은 후, -70도씨 얼린 후, 동결 건조 하였더니 다 날라가지 않았습니다. 아마 glycerol이 남은 상태인것 같습니다. 균의 damage를 줄이기 위해 glycerol을 넣은 건데, 원래 동결 건조시에 glycerol를 넣지 않나요?(20%glycerol첨가) 혹시 glycerol이 않된다며, 어떠한 방법이 있는지 답변 부탁드려요. 답변 글중에 skin milk가 있었는데요... 함유량은 얼마나 첨가하야 하나요? 질문을 요약드리면 1. 동결건조시 glycerol을 넣지 못하는지? 2. glycerol를 넣으면 않된다면, 무엇을 어떻게 넣어 동결건조 시켜야 하는지? 단, 저가 medium을 제거 위해 centrifuge를 이용하여 cell를 다운시킨 상태입니다. -
답변
이상후님의 답변
2008-08-20- 0
>안녕하세요.. > >동결건조를 했습니다... 세벽을 보호하기 위해 20% glycerol를 넣은 후 , -70도씨 냉장고에 >보관한후 동결건조 하였습니다. 그러나 다 날라가지 않고 건조되지도 않았습니다. > >혹시 동결건조 할때 glycerol를 첨가하지 않나요? > >쉬운 질문인것 같지만 저한테 너무 어렵습니다. > >도와주세요.. > > 감사합니다, 20% glycerol를 넣었다면, -70'C deep freezer에 그대로 보관하시면 됩니다. 이것을 동결건조 하시면 안됩니다. 왜냐하면 glycerol을 넣는 이유는 물의 어는점을 낮추어서 물이 얼게 될때 세포자체에 데미지를 주지 않게 하기 위한 목적입니다. 동결건조로 보관하기 위해서는 탈지분유(skim milk)를 미리 멸균한 후에 균체와 1:1의 비율로 혼합한 후에 실링을 정확하게 하고(보통은 파스테르 파이펫속에 넣은후에 끝부분을 클린벤치안에서 실링함), 동결건조후에 -70'C에서 보관하는 방법이 있습니다. -
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신재동님의 답변
2008-08-21- 0
안녕하세요.. 이렇게 도와주셔서 감사합니다.. 동결건조시에 일단 -70도씨에서 얼려야 하는데 아무것도 넣지 않으면 cell에 damage를 입지 않나요? 자료를 찾아보니 skim milk 20%넣으라는 것도 있고 또한 -20도씨에서 얼리고 -70도씨에서 얼리면 cell damage가 없다고 하던데. 어느 방법이 좋나요? 만약 skim milk를 넣는다면 cell에 정확한 g수를 알 수 없어 곤란을 격을것 같습니다.. 동결보존하는것이 아니라 건조된 cell량이 필요하거든요,. -
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장성재님의 답변
2008-08-21- 0
동결건조를 하시는 목적이 원하시는 단백질의 안정성을 위한 것이 아니라 단지 균체의 건조 중량을 계산하기 위한 것이라면 구태여 노력을 들여 동결건조까지 하실 필요가 없을 것 같은데요. 논문 등을 참조하시면 wet weight를 지표로 사용하는 경우도 있습니다. 균체를 원심분리하여 배지 성분을 제거하고, 버퍼 등으로 2-3회 세척한 다음 wet weight를 측정하신 후 그것을 기준으로 삼으시면 될 것 같습니다. 세포를 부순 후 단백질을 분리하실 목적으로 동결건조를 하실 것이라면 세포벽의 안정성은 고려하실 필요가 없습니다. 원심분리로 배지를 제거 후 버퍼로 2-3회 세척한 후 물기를 빼고 -70~80도로 얼리신 후 동결건조기에 설치하시면 됩니다.