2008-08-26
org.kosen.entty.User@79ce7369
김지혜(bluebada)
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A라는 알고있는 단백질에 결합하는 B라는 단백질을 분리하고 싶습니다.
B라는 단백질은 어떠한 정보도 알려져 있지 않은 새로운 단백질입니다.
이 단백질을 분리 정제하기 위해서는 어떠한 방법을 사용해야 하는지 알고 싶습니다.
- protein isolation
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답변 3
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답변
장성재님의 답변
2008-08-27- 0
쉽게 생각할 수 있는 방법으로는 반응성 (반응 계수)에 따라서 차이가 있을 수 있습니다만, 미지의 단백질 (B)과 상당히 강한 결합력을 보이는 결합 단백질 (A)이 존재한다면, affinity (친화성)을 이용하여 미지의 단백질 (B)을 분리할 수 있습니다. 즉, 님께서 언급하신 바를 예로들면, 알려진 A라는 단백질을 결합시킨 resin을 이용해서 affinity chrmatography법으로 정제하시면 됩니다. 일반적으로 생화학 및 세포생물학 연구에 많이 사용하는 Immunoprecipitation (IP, 면역침강법)의 경우도 위와 유사한 경우로 특정 단백질에 특이적으로 반응하는 항체와 복합체를 형성시킨 후 항체를 분리할 때 사용하는 protein A나 protein G resin을 이용하여 복합체를 정제하는 방법이 있습니다. 알려진 단백질 A가 대량으로 생산 가능할 때 위에서 언급한 단백질 결합 resin을 만들어 대량으로 A에 결합하는 미지의 단백질들을 분리 정제한 후 SDS-PAGE로 single band화한 후 단백질을 동정 (말단 아미노산 sequencing, Mass 등)하면 됩니다. IP도 같은 원리로 적용할 수 있습니다. 하지만, 단백질 A와 결합하는 (상호작용하는) 단백질은 대부분 대다수 존재하므로 특정 단백질을 동정하는 것이 쉽지만은 않습니다. >A라는 알고있는 단백질에 결합하는 B라는 단백질을 분리하고 싶습니다. > >B라는 단백질은 어떠한 정보도 알려져 있지 않은 새로운 단백질입니다. > >이 단백질을 분리 정제하기 위해서는 어떠한 방법을 사용해야 하는지 알고 싶습니다. -
답변
성학모님의 답변
2008-08-28- 0
앞서 답변하신 분의 의견이 적절하다는 판단이되며, 참고로 결합된 단백질을 분리정제하는 방법에 대한 또다른 방법을 소개해 드립니다. Capillary electroporesis (CE) 를 활용하면 특정단백질에 결합된 미지의 단백질을 분리할 수 있습니다. 즉 분자의 크기 및 전기적 특성이 유사한 경우 컬럼에서나 SDS-PAGE상에서 분리가 되지 않거나 분석할수 없는 경우가 생깁니다. 이럴 경우 모세관(capillary)에 electrical gradient를 주어서 단백질을 분리하여 분석할 수 있습니다. 물론 시간별로 fractionation이 가능하여 분리수집된 시료를 취하여 이화학적 시험을 진행하면 됩니다. 관련기기에 대한 자세한 사항을 입수하기 어려우시면 별도의 연락을 주시면 제공해드리도록 하겠습니다. -
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이윤석님의 답변
2008-09-11- 0
>A라는 알고있는 단백질에 결합하는 B라는 단백질을 분리하고 싶습니다. > >B라는 단백질은 어떠한 정보도 알려져 있지 않은 새로운 단백질입니다. > >이 단백질을 분리 정제하기 위해서는 어떠한 방법을 사용해야 하는지 알고 싶습니다. 안녕하세요 친화도가 있다는 것은 매우 좋은 일이지요. 지금 말씀하시는 것은 A라는 단백질을 가지고 있느냐 없느냐에따라 방법이 쉽고 어려워집니다. 단백질 A를 가지고 있다면 그 단백질을 resin에 고정화 한 후 B단백질을 포함하고 있는 혼합물을 흘려주고, pH등 조건을 바꿔 B단백질을 회수할 수 있습니다. 목적이 B단백질의 분석이 아니라 분리정제 회수라면, 이방법 밖에는 없겠네요. 단백질A가 없다면 증명방법도 없고 B단백질을 회수하는 것은 매우 힘들 것이라는 생각이 듭니다. 단백질 고정화하는 resin과 방법은 상용화해서 팔고 있습니다. GE에 문의해보시기 바랍니다.