2008-09-07
org.kosen.entty.User@7123409c
조은재(cej1018)
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lipase activity가 높은 균주를 스크리닝하려고 하는데, 싸고 간단히
할 수 있는 방법이 없는가 합니다. 일반적으로 기질을 사용하는 방법들이
많은 것 같은데 기질 가격이 만만치 않더라구요. 저는 수천주~만이상의 균
주 스크리닝하려는데 가격이 좀 문제가 될것 같아서. 참고로 액체배양에서
스크리닝합니다. 혹시 기질을 사용하지 않고 activity가 높은 균주를 찾
는 방법이라든지 아님 비교적 가격이 싸고 쉽게 할수 있는 방법이 없는지
궁금하네요.
* 액체에 남아있는 oil을 비교하여 적게 남아 있는 놈을 선별하는 것도 한 방법이 되지 않을 까 하는데 간단한 분석 방법이 없나요
참고로 균을 96well에서 배양하고 분석 하기 때문에 한번에 분석하려고 간단한 방법을 찾고 있습니다.
- lipase
- oil
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답변
김중재님의 답변
2008-09-08- 0
액체 배양을 통해 screening 하시겠다면, 기질이 분해되어 생성된 fatty acid 의 생성량을 측정하는 방법을 사용할 수 있을 것 같은데, screening 단계에서는 pH 변화를 indicator 를 통해 확인할 수도 있을 것 같습니다. 하지만, 일단 broth 상에서의 sensitivity 를 확인해 보아야 할 것 같고, 기질 분해에 의한 fatty acid 생성 이외의 원인으로 인해 pH 가 변화하는 false positive 도 배제할 수 없는 단점이 있습니다. 일반적으로 많은 논문에서는 lipase activity 가 있는 균주를 screening 하는 단계에서는 agar plate 방법을 많이 사용합니다. Tributyrin, triolein 또는 olive oil 등이 포함된 배지를 사용하여 (sonication 등으로 잘 emulsifying 해여 배지를 만들면 뿌연 agar plate 가 만들어집니다) clear ring 이 생성되는 colony 를 screen 하죠. 96 well plate 에서 액체 배양하여 screening 하시겠다면, 약간 변형하여 96 well plate 에 tributyrin (또는 olive oil) agar 를 굳혀서 액체 배양된 배양액을 조금 접종하고 일정 시간 효소 반응 후(?) 투명도가 변하는 것을 micro plate reader 로 읽는 방법을 해 볼 수 있을 것 같습니다. 물론, 모든 방법은 positive control 에 의해 검증을 거친뒤 본인의 실험에 적용해야 하겠죠. * tributyrin 이나 olive oil 등은 별로 비싸지 않았던 것 같습니다. ** triolein 등은 조금 비쌌던 것으로 기억합니다. >lipase activity가 높은 균주를 스크리닝하려고 하는데, 싸고 간단히 > >할 수 있는 방법이 없는가 합니다. 일반적으로 기질을 사용하는 방법들이 > >많은 것 같은데 기질 가격이 만만치 않더라구요. 저는 수천주~만이상의 균 > >주 스크리닝하려는데 가격이 좀 문제가 될것 같아서. 참고로 액체배양에서 > >스크리닝합니다. 혹시 기질을 사용하지 않고 activity가 높은 균주를 찾 > >는 방법이라든지 아님 비교적 가격이 싸고 쉽게 할수 있는 방법이 없는지 > >궁금하네요. > >* 액체에 남아있는 oil을 비교하여 적게 남아 있는 놈을 선별하는 것도 한 방법이 되지 않을 까 하는데 간단한 분석 방법이 없나요 >참고로 균을 96well에서 배양하고 분석 하기 때문에 한번에 분석하려고 간단한 방법을 찾고 있습니다.